caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Etude du rôle de Pofut1 dans la différenciation de cellules C2C12
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3.2.3.2 Inhibition de l’expression de Pofut1
Les conditions de culture et d’établissement de la cinétique de différenciation
cellulaire sont les mêmes que décrites précédemment. Les transfections sont effectuées avec
le vecteur de shRNA, pSilencer, en utilisant le système de nucléoporation (Amaxa). Ces
manipulations sont actuellement en cours au laboratoire. Une étude préliminaire en RT-PCR
semi-quantitative, 24 heures après transfection des cellules C2C12, montre une expression des
transcrits Pofut1 diminuée d’un facteur 3 par rapport à des cellules non transfectées.
L’expression de l’enzyme Pofut1 endogène n’étant pas détectée par western blot, nous
ne pourrons pas suivre par immunodétection, la diminution du niveau d’expression de la
protéine. Les niveaux d’expression des transcrits codant les facteurs myogéniques à domaine
bHLH seront également analysés.
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