caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Etude du rôle de Pofut1 dans la différenciation de cellules C2C12
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T24. Toutefois, des ARNm Myogénine sont détectés à T12. Cette présence peut être liée à un
artéfact de manipulation dû à la présence dans cette boîte de culture d’un faible taux de
cellules transfectées. D’autres analyses seront nécessaires pour en avoir la confirmation. Ces
résultats sont en accord avec ceux obtenus avec les facteurs MyoD et Myf5. La surexpression
de Pofut1 entraîne donc un retard d’environ 24 heures dans la différenciation des cellules
myoblastiques. Quand la surexpression de Pofut1 est arrêtée, l’expression de la Myogénine
augmente comme pour tenter de rattraper le retard de différenciation. La quantité de transcrits
Myogénine est, en effet, deux fois plus importante dans les cellules transfectées que dans les
cellules « normales » en fin de cinétique (à partir de T72).
Les transcrits du gène MRF4 sont absents en début de différenciation pour les deux
cinétiques. MRF4 est en effet un facteur intervenant de façon tardive puisqu’il est nécessaire à
la différenciation terminale des cellules musculaires (Valdez et al., 2000). Des transcrits
MRF4 ne sont détectés qu’à partir de T192. Il est toutefois à noter que l'expression de ce gène
en fin de cinétique est environ deux fois plus importante dans les cellules où le gène Pofut1 a
été surexprimé.
En conclusion, on peut dire que la surexpression du gène Pofut1 dans les cellules
C2C12 semble en retarder la différenciation. En effet, cette surexpression doit avoir un effet
hyper-activateur des récepteurs Notch. En conséquence, un plus grand nombre de cellules
reste dans un état indifférencié dans les boîtes de culture contenant les cellules transfectées.
Pour tous les facteurs bHLH étudiés ici (Myf5, MyoD, Myogénine et MRF4), on remarque une
plus faible expression par rapport à celle observée dans les cellules « normales » en début de
cinétique, celle-ci peut-être mise en relation avec une forte activité des récepteurs Notch, qui
inhibent le processus de différenciation (Kitzmann, Communication au Club Muscle et
développement III, 16-17 Décembre 2004, Paris). De façon générale, l’expression de ces
quatre facteurs augmente de façon considérable (environ 2 fois plus de transcrits que dans les
cellules « normales ») à partir de T48, temps où l’expression de Pofut1 redevient basale dans
les cellules transfectées. On peut donc supposer que l’arrêt de la surexpression de Pofut1
entraîne un retour à la normale de l’activité des récepteurs Notch. L’inhibition de l’expression
des facteurs bHLH étant levée, ceux-ci vont fortement s’exprimer afin que les cellules qui
étaient dans un état de quiescence puissent rapidement fusionner avec les myotubes
préexistants.
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