caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Etude du rôle de Pofut1 dans la différenciation de cellules C2C12
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Comme nous l’avons vu dans la partie 3 de l’exposé bibliographique, les facteurs
Myf5 et MyoD jouent non seulement un rôle dans la détermination des cellules souches en
cellules myoblastiques, mais leur expression est également nécessaire pour la différenciation
des myoblastes en myotubes. Au cours de la cinétique de différenciation des cellules témoins
(non transfectées), les transcrits des gènes Myf5 et MyoD sont présents de manière
permanente (T0 à T264) (Fig.73.). Aucune variation significative de la quantité de transcrits
Myf5 n'est observée jusqu’à T48, par la suite celle-ci diminue jusqu'à la fin de la cinétique.
Cette variation d'expression est en corrélation avec l’état différencié des cellules C2C12 à ces
stades. La quantité de transcrits MyoD est relativement faible au début de la cinétique puis
augmente légèrement à partir de T48. Dans les cellules transfectées, des transcrits des gènes
Myf5 et MyoD sont, comme précédemment, présents tout au long de l’étude. Cependant, le
profil d’expression de Myf5 est inversé. En effet, si en début de cinétique le taux d’expression
est relativement comparable à celui des cellules non transfectées, il ne diminue pas mais
augmente à partir de T48. De même, le taux d’expression des transcrits MyoD, plus faible que
dans les cellules non transfectées en début de cinétique, augmente en fin de cinétique à partir
de T72 au lieu de rester stable. Ces résultats peuvent être mis en relation avec le niveau
d’expression de Pofut1. En effet, il est envisageable qu’en début de cinétique, quand les
cellules transfectées expriment fortement Pofut1, les récepteurs Notch soient hyper-activés et
inhibent donc la transcription du facteur MyoD (cf. partie 3, exposé bibliographique). Les
répecussions de l’activité des récepteurs Notch sur Myf5 ne sont pas déterminés, il est
cependant envisageable que leur hyper-activation inhibe également ce facteur myogénique. A
des temps plus avancés de la cinétique, l’expression de Pofut1 redevenant basale, les cellules
reprennent le processus de différenciation myogénique et pour ce faire expriment des taux
importants d’ARNm MyoD et Myf5 qui décroissent de nouveau en fin de cinétique.
Des transcrits correspondant aux gènes Myogénine et MRF4 (Myf6) sont normalement
présents tardivement au cours de la différenciation de cellules myoblastiques (Buckingham,
1992). Au cours de la cinétique de différenciation des cellules C2C12 non transfectées, le
gène Myogénine est exprimé de façon basale dès T0. Par la suite, son expression augmente
très rapidement, dès 6h de différenciation (T6), pour atteindre un maximum à T72. La
quantité de transcrits reste importante jusqu’à la fin de la cinétique, en relation avec un
nombre de myotubes important. Dans les cellules transfectées, l'expression du gène
Myogénine est retardée puisque la quantité de transcrits ne devient significative qu'à partir de
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