caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Etude du rôle de Pofut1 dans la différenciation de cellules C2C12
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3.2.3.1.3 Répercussion de la surexpression de Pofut1 sur l’expression des
facteurs myogéniques bHLH
Pour appréhender à l’échelle moléculaire la répercussion de la surexpression du gène
Pofut1 sur la différenciation des cellules C2C12, une étude portant sur le niveau d’expression
des transcrits du gène CD34 et de quatre marqueurs myogéniques à domaine bHLH (MyoD,
Myf5, MRF4 et Myogénine) a été réalisée (Fig.73.). Ces manipulations ont été effectuées par
Mathilde Janot (étudiante en Master II recherche) et Fabrice Dupuy (Maître de Conférences).
La molécule CD34 est un marqueur des cellules indifférenciées. Chez l’Homme, par
exemple, il est le marqueur le plus couramment utilisé pour caractériser les cellules souches et
les progéniteurs. Il est exprimé, entre autres, dans les cellules souches hématopoïétiques
adultes et dans des cellules satellites du muscle squelettique adulte (Beauchamp et al., 2000).
Dans la cinétique de différenciation des cellules C2C12 non transfectées, la quantité de
transcrits CD34 diminue à partir de T24. Cette diminution coïncide avec l’apparition des
premiers myotubes (T48). En effet, la diminution du nombre de cellules indifférenciées et
l’augmentation de la taille des cellules myogéniques après induction de la différenciation,
s’accompagnent d’une diminution de la quantité de l’antigène CD34 (Tamaki et al., 2003).
Dans les cellules transfectées avec la construction pcDNA/TOPO3.1-Pofut1 murin, le
marqueur CD34 affiche un profil d’expression différent. En effet, on constate une
augmentation du niveau d’expression des transcrits jusqu'à T48 puis, globalement, une
diminution jusqu'à la fin de la cinétique (T48 à T264). Ce profil peut-être mis en relation avec
la proportion de cellules qui vont rester dans un état indifférencié. En effet, il est envisageable
que la surexpression de Pofut1 empêche les cellules transfectées de se différencier en
myotubes, de ce fait une plus grande proportion de cellules continue à exprimer le marqueur
CD34 par rapport aux cellules au même stade mais n’ayant pas subi la transfection. Par la
suite, la diminution du niveau d’expression de Pofut1, due aux divisions cellulaires et à la
destruction du plasmide, autorise les cellules à rentrer dans le processus de différenciation,
d’où la diminution de l’expression du CD34. Ces résultats suggèrent qu’une O-fucosylation
intense dans les cellules C2C12 entraîne un blocage des cellules dans un état indifférencié et
provoque ainsi un retard dans le processus de différenciation. Ceci pourrait être mis en
relation avec une hyper-activation du récepteur Notch, impliqué dans le maintien d’une
population cellulaire dans un état quiescent.
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