caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Mise en place de la culture primaire de myoblastes bovins et des vecteurs
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après séquençage grâce à deux amorces complémentaires du vecteur (T7 : 5’-
AATACGACTCACTATAG-3’ et M13 : 5’- GTAAAACGACGGCCAGT-3’).
Figure 61 : Vecteur pSuper.gfp de shRNA.
L’expression du shRNA est sous le contrôle du promoteur H1 et celle de l’eGFP sous le contrôle du promoteur
fort de la Phosphoglycérate kinase (PGK).
3.1.3 Transfection des cellules bovines en culture primaire
La culture primaire de cellules présente comme intérêt de mieux refléter ce qui se
passe in vivo par rapport aux lignées cellulaires qui sont modifiées, de façon spontanée ou
induite, pour devenir immortelles. Plus le nombre de passages (décollement, dilution et
repiquage) augmente et plus les caractéristiques de ces cellules s’éloignent de celles de
cellules primaires en culture. Néanmoins, la culture primaire de cellules présente des
inconvénients majeurs. Le nombre de passages des cellules est limité, nous ne pouvons
repiquer nos cellules myoblastiques bovines que 5 ou 6 fois. Passées ces étapes, les cellules
cessent de proliférer et meurent. Ainsi, à chaque fois que nous avons besoin de cellules, il faut
en isoler et en cultiver de nouvelles. Le second inconvénient des cultures primaires auquel
nous nous sommes heurté est la difficulté de transfection.
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