caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Mise en place de la culture primaire de myoblastes bovins et des vecteurs
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Figure 57 : Photographies en lumière blanche et immunomarquages des myoblastes et myotubes
bovins.
A, myoblastes bovins en phase proliférative (X10); B, myotubes formés après 120 heures en milieu de
différenciation (X10); C, marquage d’un myotube avec l’anticorps anti-laminine (X40); D, marquage à l’iodure
de propidium (IP) afin de visualiser les noyaux (X40); E, réseau de myotubes bovins marqués avec l’anticorps
anti-laminine (X10). L’anticorps anti-laminine, produit chez la souris est utilisé comme anticorps primaire.
L’anticorps secondaire est un anticorps anti-IgG de souris couplé à la FITC.
En quelques mois, nous avons donc mis en place une culture de myoblastes bovins et
nous avons su en maîtriser la culture jusqu'à son terme, la différenciation en myotubes.
Néanmoins, comme nous le verrons plus loin, la culture primaire de cellules présente
plusieurs inconvénients majeurs.
3.1.2 Construction des vecteurs eucaryotes pour les
transfections
Un vecteur d’expression eucaryote permettant de surexprimer l’enzyme Pofut1A
bovine, et un autre vecteur dit de shRNA (short hairpin RNA) permettant d’inhiber
l’expression d’ARNm du gène Pofut1a, ont été construits.
3.1.2.1 Vecteur de surexpression
Conscients du faible taux de transfection généralement atteint avec des cellules en
cultures primaires, nous avons choisi d’utiliser un vecteur d’expression eucaryote portant la
séquence codante de l’eGFP (ou d’un de ses dérivés). Ce vecteur nous permet de vérifier le
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