caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Mise en place de la culture primaire de myoblastes bovins et des vecteurs
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3.1 Mise en place de la culture primaire de
cellules satellites bovines et des vecteurs
d’expression eucaryote
Le but ultime de cette thèse étant d’évaluer le rôle joué par l’enzyme bovine Pofut1 au
cours de la différenciation de cellules myoblastiques en culture, nous avons mis en place
l’isolement et la culture primaire de cellules satellites extraites du muscle squelettique
Semitendinosus d’embryons bovins.
3.1.1 Isolement, culture et différenciation
Les cellules satellites bovines, une fois extraites du muscle squelettique (cf. annexe III
qui constitue la partie « Matériels et Méthodes » de cette troisième partie), sont placées dans
un milieu de culture qui les engage dans le cycle cellulaire pour devenir des myoblastes.
Quarante huit heures après l’isolement, les cellules satellites musculaires sont triées de façon
à éliminer les fibroblastes isolés de façon simultanée, lesquels, de par leur vitesse de
prolifération prendraient rapidement le dessus sur les cellules musculaires. Ce tri s’effectue au
FACS (Fluorescence Activated Cell Sorter) grâce à un marquage utilisant un anticorps anti-
CD56 couplé à la phycoérythrine (PE) (Becton-Dickinson, Le Pont de Claix, France).
L’anticorps reconnaît de façon spécifique les myoblastes, qui portent à leur surface le
marqueur CD56 ou PSA-NCAM (polysialic acid-neural cell adhesion molecule) intervenant
dans les processus de migration neuronale et musculaire, alors que les fibroblastes en sont
dépourvus. Comme contrôle isotypique de fluorométrie, nous utilisons des IgG1 de souris
couplées à l’isothiocyanate de fluorescéine (FITC) (Becton-Dickinson). Ils permettent
d’estimer et de corriger la liaison non spécifique des anticorps aux cellules (Fig.56.).
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