caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...
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Résultats-Discussion : Résultats complémentaires de la publication 2<br />
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d’un mode d’action conservé de la O-fucosyltransférase 2 dans les muscles squel<strong>et</strong>tiques<br />
a<strong>du</strong>ltes bovins <strong>et</strong> murins.<br />
2.2.3 Synthèse <strong>et</strong> conclusion<br />
Durant c<strong>et</strong>te <strong>étude</strong>, nous avons donc déterminé le profil d’expression <strong>des</strong> <strong>enzymes</strong><br />
Pofut1 <strong>et</strong> Pofut2 <strong>bovines</strong> dans treize tissus d’a<strong>du</strong>ltes <strong>et</strong> huit tissus d’embryons. Mis à part les<br />
formes atypiques détectées dans les muscles squel<strong>et</strong>tiques a<strong>du</strong>ltes, seules les protéines Pofut1<br />
<strong>et</strong> Pofut2 actives, issue de la tra<strong>du</strong>ction <strong>des</strong> variants 1a <strong>et</strong> 2a, seraient détectées in vivo sous<br />
une forme respectivement di- <strong>et</strong> triglycosylée. Les variants Pofut1b à 1e <strong>et</strong> Pofut2b à 2e mis<br />
en évidence lors de notre précédente <strong>étude</strong> ne sont donc pas tra<strong>du</strong>its in vivo (sauf peut-être<br />
Pofut2B dans le cerveau a<strong>du</strong>lte) <strong>et</strong> pourraient jouer un <strong>rôle</strong> au niveau transcriptionnel dans la<br />
régulation de l’expression <strong>des</strong> <strong>enzymes</strong> Pofut1 <strong>et</strong> Pofut2 actives.<br />
L’<strong>étude</strong> de l’impact <strong>des</strong> sites de N-glycosylation de l’enzyme Pofut1 bovine révèle que<br />
la mutation <strong>du</strong> second site de N-glycosylation ne modifie pas la solubilité de l’enzyme mais<br />
diminue son activité catalytique. La mutation <strong>du</strong> premier site de N-glycosylation entraîne<br />
quant à elle la disparition de la protéine de la phase soluble d’un extrait protéique de cellule<br />
COS-1 transfectées, suggérant son agrégation dans le réticulum endoplasmique. En eff<strong>et</strong>, seul<br />
un traitement de la fraction insoluble de ces extraits par de l’urée 10M perm<strong>et</strong> sa libération <strong>et</strong><br />
sa détection en western blot. Ce traitement n’autorisant pas les tests d’activité enzymatique, il<br />
nous a été impossible de vérifier si l’enzyme pro<strong>du</strong>ite possédait encore une activité Ofucosyltransférase.<br />
Une <strong>étude</strong> similaire à celle réalisée sur Pofut1, portant sur les fonctions <strong>des</strong> N-glycanes<br />
de l’enzyme Pofut2 est envisagée. Etant donné l’importance démontrée de la O-fucosylation<br />
<strong>des</strong> domaines EGF dans les processus développementaux <strong>et</strong> dans la myogenèse, mes efforts se<br />
sont d’avantage centrés sur Pofut1.<br />
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