caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Résultats complémentaires de la publication 2
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d’immunoprécipitation utilisant l’anticorps anti-Pofut1 ont été conduites. Ces expériences
n’ont malheureusement pas été concluantes, sans doute à cause du faible niveau d’expression
de ces enzymes. Il est certes possible que la présence de ces protéines de faible masse
moléculaire soit liée à la traduction d’un ou plusieurs autres variants transcriptionnels non
encore identifiés. Néanmoins, cette hypothèse semble peu probable. En effet, étant donné leur
faible taille potentielle, nous aurions dû les amplifier lors de nos études par RT-PCR. Il
semble peu probable également que ce marquage soit lié à une dégradation protéolytique de la
protéine Pofut1 lors de la préparation des échantillons, les extractions protéiques étant
réalisées simultanément et en présence de puissants inhibiteurs de protéases. De plus, il est
peu vraisemblable que ce type de dégradation génère une entité protéique unique.
L’hypothèse la plus vraisemblable est qu’il se produise un clivage protéolytique spécifique au
sein des muscles squelettiques adultes. On sait en effet, que certaines protéases sont
spécifiques de ces tissus, comme la Calpaïne musculaire (Bartoli et Richard, 2005). Ce
clivage conduirait à la présence dans ces tisssus d’une forme inactive de l’enzyme Pofut1.
Ceci peut être relié avec la forte activité des récepteurs Notch lors de la formation des muscles
squelettiques au cours du développement embryonnaire, et à leur activité basale dans les
tissus musculaires adultes (Conboy et al., 2003). Pour conforter cette hypothèse, il serait
nécessaire d’effectuer des tests d’activité enzymatique à partir d’extraits protéiques totaux de
muscles embryonnaires et adultes.
L’étude de l’expression tissulaire de Pofut1 révèle donc que la forme active est
invariablement présente dans certains tissus bovins (cerveau, cœur, foie, poumon, rate et
reins) de l’adulte et de l’embryon. A l’inverse, les tissus musculaires squelettiques adultes
n’expriment pas les mêmes formes de la protéine. Il serait intéressant d’analyser l’expression
de la protéine Pofut1, dans des tissus musculaires squelettiques provenant d’embryons et de
nouveaux-nés à des stades de développement différents, ceci afin de mettre en évidence la
transition entre l’expression de la forme active et de la forme tronquée.
Dans le but de révéler si des formes atypiques de la protéine Pofut1 existaient dans les
muscles squelettiques d’organismes appartenant à d’autres espèces, nous avons utilisé
l’anticorps anti-Pofut1 pour une réaction croisée sur des protéines extraites de tissus de deux
autres espèces de Mammifères. Les tissus adultes examinés sont le coeur et le Semitendinosus
de souris, et deux muscles squelettiques de porc (muscles de la cuisse et longe) (Fig.53.).
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