caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Résultats complémentaires de la publication 2
__________________________________________________________________________________________
Comme nous l’avons vu dans le chapitre précédent, la protéine Pofut1 qui a servi
d’antigène pour la production des anticorps, porte encore le peptide signal et une étiquette
(His)6 à chacune de ses extrémités. Sa masse moléculaire déduite de la séquence peptidique
est de 46,9 KDa. Dans tous les tissus bovins adultes et embryonnaires, à l’exception des
muscles squelettiques adultes, nous révélons une bande protéique de taille similaire. La taille
prédite de la protéine Pofut1 active et diglycosylée (cf. Résulats complémentaire publication
1), après clivage du peptide signal dans le réticulum endoplasmique est de 45 KDa. On peut
par conséquent conclure que tous les tissus, sauf les muscles chez l’adulte, expriment une
protéine Pofut1 portant deux N-glycanes. Ceci est confirmé par les résultats obtenus dans la
publication 2 où la déglycosylation partielle par l’enzyme PNGase F de la protéine
recombinante Pofut1 bovine, produite dans les cellules COS-1, génère trois entités protéiques
correspondant respectivement à des protéines di-, mono- et déglycosylées. Ce même
traitement réalisé pendant 20 heures sur un extrait de protéines totales de foie bovin produit
une entité protéique de 41 KDa correspondant à la taille attendue de l’enzyme Pofut1 sans son
peptide signal et sans glycane. Aucune protéine issue de la traduction des variants Pofut1b à
1e (cf. Publication 1) n’a été mise en évidence dans les tissus bovins. In vivo, ces transcrits,
non traduits, pourraient jouer un rôle dans la régulation du niveau d’expression de l’enzyme
Pofut1 active (Lareau et al., 2004). En effet, de plus en plus d’études tendent à montrer que de
nombreux ARN non codants (ARNnc) seraient présents dans les cellules eucaryotes. Ceux-ci
seraient impliqués dans des processus de régulation de l’expression génique à plusieurs
niveaux : ARN interférence, déméthylation de l’ADN, régulation de la structure de la
chromatine (Costa, 2005). L’exemple le plus connu est l’inactivation du chromosome X chez
les Mammifères par l’ARNnc XIST (Rastan, 1994). Des dérégulations du niveau d’expression
de ces ARNnc seraient impliquées dans l’apparition de certaines pathologies cancéreuses
(Srikantan et al., 2000) et neurologiques (Runte et al., 2004).
Une protéine d’environ 32 KDa est reconnue dans chacun des extraits protéiques des
muscles squelettiques adultes quelque soit leur métabolisme, lent/oxydatif (Diaphragme,
Onglet, Rectus abdominis) ou rapide/glycolytique (Semitendinosus, Longissimus thoraci). La
bande correspondante est cependant de très faible intensité dans l'onglet où une autre bande
protéique d’environ 36 KDa est détectée. Donc, malgré la présence de transcrits pofut1a dans
les muscles squelettiques chez l’adulte, la protéine correspondante Pofut1A n'est pas révélée.
Aucun des autres transcrits caractérisés dans l’étude précédente ne peut expliquer la présence
de protéines Pofut1 de cette taille. Afin d’identifier ces protéines, des expériences
176