caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Résultats complémentaires de la publication 1
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Figure 48 : Activité O-fucosyltransférase 2 des protéines codées par les variants bovins Pofut2a
à Pofut2e.
A, Les activités sont données en nmole par heure et par mg de protéines totales. Elles sont indiquées au dessus
de chaque histogramme. B, Analyses en western blot de l’expression des protéines recombinantes dans les
cellules COS-1 et détection à l’aide de l’anticorps anti-Pofut2. 50µg de protéines totales ont été déposées; les
tailles des protéines détectées sont indiquées.
Dans le cas de Pofut1, seul le variant Pofut1a code une protéine Ofucosyltransférase
1 active. Dans le cas de Pofut2, seul le variant Pofut2a code une protéine
ayant une activité significative par rapport à l’activité endogène détectée dans les cellules
COS-1. Le variant Pofut2b semble coder une enzyme ayant une activité O-fucosyltransférase
2. Néanmoins, l’activité de celle-ci, dans les conditions du test in vitro, n’est pas significative.
Les autres variants de Pofut2 codent tous la même protéine tronquée dépourvue d’activité Ofucosyltransférase.
Afin de vérifier l’expression des protéines recombinantes, nous avons effectué des
analyses par western blot, avec nos anticorps polyclonaux, sur les lysats protéiques des
cellules COS-1 transfectées. Dans la figure 47, l’anticorps anti-Pofut1A bovin reconnaît les
protéines Pofut1A, B et C à leurs masses moléculaires prédites, respectivement 45, 41 et 27
KDa (sans le peptide signal et diglycosylées). Cependant, l’anticorps ne reconnaît pas les
protéines D et E, dont la masse moléculaire prédite (sans le peptide signal et diglycosylées)
est de 22 KDa.
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