caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Résultats complémentaires de la publication 1
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Dans le but de déterminer si les variants transcriptionnels sont susceptibles de coder
des protéines dotées d’une activité O-fucosyltransférase, des tests d’activité in vitro ont été
effectués. La séquence codante de chacun des variants transcriptionnels a été clonée dans le
vecteur d’expression eucaryote pcDNA/TOPO3.1. Les plasmides recombinants ont ensuite
étaient utilisés pour transfecter des cellules COS-1. Les tests d’activité sont réalisés avec 5µg
de lysats cellulaires en utilisant comme substrat donneur le GDP-fucose radiomarqué au C 14 et
comme substrats accepteurs, le domaine EGF du facteur de coagulation IX humain pour
Pofut1 (Fig.47.) ou le troisième domaine TSR de la thrombospondine I humaine pour Pofut2
(Fig.48.).
Figure 47 : Activité O-fucosyltransférase 1 des protéines codées par les variants bovins Pofut1a
à Pofut1e.
A, Les activités sont données en nmole par heure et par mg de protéines totales. Elles sont indiquées au dessus
de chaque histogramme; B, Analyses en western blot de l’expression des protéines recombinantes dans les
cellules COS-1 et détection à l’aide de l’anticorps anti-Pofut1. 100 µg de protéines totales ont été déposées; les
tailles des protéines détectées sont indiquées.
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