caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Résultats complémentaires de la publication 1
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La masse moléculaire attendue, déduite de la séquence peptidique après clivage du
peptide signal, est pour Pofut1A de 41 KDa, à laquelle il faut ajouter la masse moléculaire des
N-glycanes potentiellement présents sur cette enzyme réticulaire, soit 4 KDa (Wang et
Spellman, 1998). Les masses moléculaires attendues, déduites des séquences peptidiques
après clivage du peptide signal sont pour Pofut2A de 44 KDa et pour Pofut2B de 46 KDa. La
protéine Pofut2A bovine, comme ses orthologues Mammaliennes, possède trois sites
potentiels de N-glycosylation. Aucune étude n’a, pour l’instant, porté sur le nombre et la
composition des N-glycanes présents sur l’enzyme Pofut2. Néanmoins, des hypothèses ont été
émises sur sa localisation réticulaire chez l’Homme et la souris (Luo et Haltiwanger, 2005). Il
est donc probable que, si celle-ci est glycosylée, ses N-glycanes soient également de type
oligomannosidique voire hybride. Si on admet que la masse moléculaire de chaque N-glycane
est de 2 KDa (masse moléculaire approximative de chaque N-glycane de Pofut1), la protéine
recombinante de 50 KDa révélée dans les extraits de cellules COS-1 transfectées avec la
construction pcDNA/TOPO3.1-Pofut2a est une forme triglycosylée de l’enzyme. La protéine
recombinante de 52 KDa révélée dans les extraits de cellules transfectées avec la construction
pcDNA/TOPO3.1-Pofut2b est une forme triglycosylée de l’enzyme Pofut2B qui possède
également les 3 sites potentiels de N-glycosylation.
Etant donné les fortes homologies entre les O-fucosyltransférases de différentes
espèces de Mammifères, il n’est pas étonnant que nos anticorps croisent avec les enzymes
endogènes présentes dans les cellules COS-1 (cellules de rein de singe vert). Toutefois, dans
ces cellules, l’enzyme Pofut1 semble plus faiblement reconnue que l’enzyme Pofut2. Seule
une très fine bande est visible. Toutefois, si une quantité deux fois supérieure d’extrait de
protéines issues des cellules COS-1 est déposée, une bande de plus forte intensité est alors
marquée (voir figure 47B, piste 1).
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