caractérisation des enzymes bovines et étude préliminaire du rôle ...

Résultats-Discussion : Résultats complémentaires de la publication 1
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Les tailles extrêmement proches des variants correspondant au gène Pofut2, n’ont pas
permis de les séparer sur un gel d’agarose (Fig.38.), contrairement à ceux du gène Pofut1
présentés dans la figure 5A de l’article.
Figure 38 : Expression tissulaire des variants transcriptionnels de Pofut2 dans les tissus de bovin
adulte.
Les amorces utilisées sont référencées dans la table I de la publication 1. Des PCR réalisées avec un couple
d’amorce spécifique de l’actine permettent de vérifier la qualité des ARNm ayant servi à la transcription inverse.
Chaque amplification obtenue est en fait un mélange de différents variants
transcriptionnels du gène Pofut2. Nous avons donc récupéré ces amplifiats pour chacun des
tissus et nous les avons ensuite clonées dans le plasmide TOPO2.1. Ce dernier est un
plasmide de type vecteur T. La présence d’une thymine non appariée et liée à la
topoisomérase à chaque extrémité du vecteur linéarisé par l’enzyme EcoRV, endonucléase
générant des extrémités à bord franc, permet le clonage d’un amplifiat du fait de l’ajout d’une
adénine aux extrémités 3’ des fragments d’ADN néosynthétisés par l’ADN polymérase que
nous utilisons. Les différents inserts ne pouvant être distingués ni par leur taille ni par des
profils de restriction différents, nous avons procédé, après transformation bactérienne et mini
préparation d’ADN plasmidique, au séquençage d’un grand nombre de clones. Ce travail a
permis de dresser le tableau présenté dans la publication 1 (Figure 5B/Pofut2).
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