Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...

tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013
Chapitre 3 : Interactions des nanoparticules avec les cellules
expériences). On peut ainsi noter que, lorsque la concentration est dix fois plus faible, les
particules Si+10 et Si-10 ne présentent plus de toxicité après 24 heures d’exposition, on aurait
même plutôt une prolifération cellulaire plus importante à 24 heures d’exposition à Si+10.
Figure 3-6: Activité métabolique mesurée par le test à la résazurine (a) et évolution du nombre de
cellules vivantes (bleu de Trypan) (b) après 4 heures et 24 heures d’exposition aux
nanoparticules (0,6 mg/mL dans le milieu de culture et 0,06 mg/mL pour Si±10); * p < 0,05 par
rapport au témoin
La mesure de l’activité métabolique par le test à la résazurine permet d’obtenir des
informations complémentaires sur l’influence des nanoparticules sur la réponse physiologique
des cellules (figure 3.6). L’activité mitochondriale peut être mesurée avec différents tests.
Notre choix s’est porté sur la résazurine plutôt que sur le MTT (Voytik-Harbin 1998, Hamid
2004) car ce test a l’avantage de ne pas être toxique pour les cellules, autorisant ainsi à
poursuivre l’étude sur les mêmes cellules pour des temps plus longs. Avant d’effectuer le test
à la résazurine, il est important de s’assurer que les nanoparticules n’interfèrent pas avec ce
test. Tout d’abord, avant d’incuber les cellules avec une solution de résazurine, ces dernières
ont été rincées pour enlever toutes les particules qui ne sont pas en interaction avec les
cellules. Ceci permet d’éviter d’avoir des problèmes de diffusion de la lumière lors de la
mesure de l’absorbance. Ensuite, pour s’assurer que les nanoparticules ne réagissent pas avec
la résazurine, une suspension de chacune des particules étudiées a été incubée avec une
solution de résazurine, dans les conditions exactes du test. Les absorbances mesurées n’étaient
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