Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...

tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013
Chapitre 6 : Protocoles expérimentaux
phosphate), les suspensions sont gardées en atmosphère N2 et mises à 37°C. 1 mL de
suspension est prélevé à chaque temps d’analyse et centrifugé 15 minutes à 6000 rpm pour
mesurer l’absorbance à 290 nm de la solution sans nanoparticules.
Figure 6-5: Réaction du DTT avec un pont disulfure
6.4.3 INTERACTIONS AVEC LES CELLULES : ENDOCYTOSE – EXOCYTOSE
L’internalisation des nanoparticules après exposition des cellules à une suspension à 0,6
mg/mL et leur localisation intracellulaire sont mises en évidence par microscopie à
fluorescence, comme décrit dans le paragraphe 6.2.3.1.
La dissolution intracellulaire des particules et/ou leur exocytose, après 7 jours d’exposition
des cellules à une suspension à 0,6 mg/mL de nanoparticules dans le milieu de culture, sont
mesurées comme décrit dans le paragraphe 6.2.3.3.
6.4.4 LIBERATION D’UNE MOLECULE ENCAPSULEE
6.4.4.1 Synthèse de nanoparticules incorporant un marqueur nucléaire : Hoechst
Pour étudier la libération d’une molécule incorporée par interactions électrostatiques dans les
particules de silice, des nanoparticules de silice fluorescentes, incorporant un marqueur
nucléaire Hoechst 33258, sont synthétisées selon la synthèse décrite dans le paragraphe
6.1.1.5. L’influence de la fonctionnalisation par le disulfure est étudiée avec trois
compositions : 0%, 20% et 40% massique de disulfure. Lors de la synthèse, après ajout du
TEOS, du disulfure et de la solution FITC-APTES, une solution de Hoechst 33258 à 1 mM
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