Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...

tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013
Appareil et protocole opératoire
Chapitre 6 : Protocoles expérimentaux
Toutes les mesures ont été effectuées avec un Zeta Plus de Brookhaven. Deux à trois
millilitres d’une suspension de particules dans une solution de KCl 10 mM ou dans du milieu
de culture sont placés dans la cellule. L’électrode est introduite en prenant soin de ne pas
former de bulles dans la cellule.
(ii) Détermination de la composition par analyses élémentaires
Les échantillons des nanoparticules n%SS sèches ont été envoyés au service central d’analyse
du CNRS de Solaize. Le silicium est dosé par ICP-AES, le carbone et l’azote par
catharométrie et le soufre par infrarouge. Cette analyse permet d’obtenir le rapport massique
des différents éléments.
(iii) Greffage du fluorophore
- Fluorescence
Les spectres de fluorescence des nanoparticules greffées avec la FITC sont enregistrés sur un
spectromètre Horiba Jobin Yvon FluoroMax 3, avec une excitation à 485 nm.
- Détermination du taux de greffage de la FITC par spectroscopie UV-visible
Le taux de greffage de fluorescéine correspond à la fraction de FITC réellement incorporée
dans les particules au cours de la synthèse. Pour le déterminer, les particules sont dissoutes en
milieu basique (NaOH 0,2 M). Cette étape permet de libérer la fluorescéine dont la
concentration est ensuite déterminée par absorbance UV-visible. Le spectre d’absorption de la
fluorescéine est très sensible au pH et à la polarité du solvant, il faut donc s’assurer d’avoir la
bonne concentration finale en NaOH. Pour s’assurer que la dissolution est complète, la
réaction est poursuivie pendant 24 heures, puis l’absorbance à 490 nm est mesurée. Afin de
déterminer la concentration en fluorescéine, une gamme étalon de FITC dissoute dans NaOH
0,2 M est préparée. On en déduit le coefficient d’absorption molaire de la FITC dans ces
conditions qui vaut 5,19.10 4 mol -1 .L.cm -1 . Il faut noter que ce protocole fait l’hypothèse
suivante : soit la liaison APTES-FITC est rompue en conditions basiques, soit cette liaison ne
perturbe pas le spectre d’absorption UV-visible.
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