Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...

tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013
Chapitre 6 : Protocoles expérimentaux
particules fluorescentes, les mêmes concentrations en FITC et APTES sont utilisées. (2,57
mmol/L de FITC et 171 mmol/L d’APTES dans l’éthanol absolu dans 10 mL d’éthanol)
6.1.1.2 Synthèse de particules fluorescentes, positives, de diamètre supérieur à 30 nm
Les particules de diamètre supérieur à 30 nm sont synthétisées par voie sol-gel de type Stöber
(STöber 1968, Nyffenegger 1993). Dans de l’éthanol, sont ajoutés sous agitation magnétique
l’ammoniaque (30%), qui sert de catalyseur, puis la source de silice (TEOS, Aldrich) et enfin
la solution FITC-APTES. Selon le diamètre voulu, les concentrations des différents
composants sont ajustées (tableau 6.1). Cette solution est agitée à température ambiante
pendant 48 heures. Les particules ainsi obtenues sont dialysées afin d’éliminer les réactifs
n’ayant pas réagi (TEOS, APTES, FITC-APTES), le catalyseur (NH4OH), et changer de
solvant pour avoir une suspension de nanoparticules dans l’eau. Les suspensions sont
conservées dans l’acide acétique 17 mM.
Nanoparticules TEOS L-lysine NH4OH APTES-FITC H2O Ethanol
Si 40 3,8 mL - 4,0 mL 3,8 mL - 100 mL
Si 200 4,0 mL - 5,5 mL 4,0 mL 3,0 mL 100 mL
Si 10 4,0 mL 0,255 g - 4,0 mL 51,25 mL -
Tableau 6-1: Composition des synthèses
6.1.1.3 Synthèse de nanoparticules fluorescentes de diamètre inférieur à 20 nm
Pour obtenir des nanoparticules de diamètre inférieur à 20 nm, nous avons utilisé le protocole
dérivé de la synthèse Stöber décrit par L. Thomassen (Thomassen 2010). Le solvant utilisé est
l’eau et le catalyseur la L-Lysine. Le TEOS est ajouté goutte à goutte à une solution de L-
lysine à 60°C avant la solution FITC-APTES. La solution est laissée sous agitation
magnétique à 60°C pendant 72 heures. Après dialyse, les suspensions sont conservées dans
l’eau.
6.1.1.4 Modification de surface : greffage de groupements amines
Les particules synthétisées par voie Stöber classique ont déjà des groupements amines greffés
en surface. Par contre les particules obtenues avec la lysine présentent une charge de surface
négative. Pour obtenir des particules de diamètre inférieur à 20 nm positives, nous avons
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