Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...

tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013
Chapitre 6 : Protocoles expérimentaux
6.1 Synthèse et caractérisation des nanoparticules de silice
6.1.1 SYNTHESE
Toutes les synthèses incorporant de la fluorescéine sont conduites à l’abri de la lumière
(dans des bouteilles enveloppées d’un film d’aluminium).
Toutes les suspensions de nanoparticules sont purifiées par dialyse (membranes à dialyse
en cellulose régénérée et seuil de rétention 3500 kDa) dans l’eau – chaque bain de dialyse
correspond à environ 10 fois le volume de solution de particules à dialyser – avec un total de
cinq bains d’au minimum 4 heures. La durée des bains de dialyse permet d’atteindre
l’équilibre des concentrations de part et d’autre de la membrane. Dans le cas des particules
ayant des groupements amines en surface, le dernier bain est fait dans de l’acide acétique à 17
mM. Ce dernier permet d’avoir une suspension stabilisée de nanoparticules en condition
acide. En effet, les groupements amines sont alors protonés, renforçant ainsi les interactions
électrostatiques répulsives entre particules pour limiter l’agrégation.
Toutes les particules sont conservées en suspension, à 4°C, à l’abri de la lumière.
6.1.1.1.1 Greffage covalent de la fluorescéine
La fluorescéine isothiocyanate (FITC) est greffée de façon covalente au 3-
aminopropyl(triethoxy)silane (APTES) par réaction entre le groupement amine du silane et le
groupement thiocyanate de la FITC (figure 6.1).
Figure 6-1: Equation bilan du greffage de la fluorescéine sur l’APTES
Un excès d’APTES est mis à réagir avec la FITC dans l’éthanol anhydre, sous agitation
magnétique à température ambiante pendant 16 heures. La réaction s’effectue en milieu
anhydre pour éviter l’hydrolyse-condensation de l’APTES. Pour toutes les synthèses de
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