Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...

tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013
Chapitre 5 : Nanoparticules de silice pour la libération intracellulaire de principes actifs
dialysées pour retirer les molécules n’ayant pas réagi, la fluorescence mesurée est donc due au
marqueur Hoechst incorporé dans les particules de silice. Cette différence d’intensité peut être
due à un nombre plus important de molécules Hoechst incorporées dans les particules 20%SS
et 40%SS que dans les 0%SS. Ceci pourrait être le résultat de l’incorporation de Hoechst dans
les "poches" organiques formées par les molécules du silane BTSPD condensé par un seul de
ses atomes de silicium.
Les trois types de particules, 0%SS, 20%SS et 40%SS avec Hoechst, présentent donc un
diamètre et une charge de surface similaires dans le milieu de culture. Les différences de
comportement que l’on pourra observer par la suite seront donc liées à la présence des ponts
disulfures et à l’éventuelle modification des interactions de Hoechst 33258 avec la matrice de
silice en fonction de la composition des particules.
5.4.2 LIBERATION DU MARQUEUR HOECHST 33258 DES PARTICULES DE SILICE
La figure 5.14 présente le suivi par fluorescence de la libération du marqueur Hoechst 33258
des particules de silice 0%SS. Dans cette étude, le signal bleu représente le marqueur
Hoechst, le vert correspond toujours à la FITC (et donc initialement aux nanoparticules) et le
signal rouge correspond à la membrane pour les clichés a et b et à un autre marqueur
nucléaire (iodure de propidium) pour les autres clichés. Le double marquage du noyau (signal
rose dû à la colocalisation de Hoechst et iodure de propidium) permet de s’assurer que le
marqueur Hoechst libéré parvient bien à destination. On observe qu’après 6h d’incubation, il
semble y avoir quelques particules dans la cellule mais le noyau n’apparaît pas comme
marqué avec Hoechst (figure 5.14 a). C’est le cas à partir de 8 heures d’exposition (figure
5.14 b). Pour des temps supérieurs, on constate que le noyau reste marqué avec Hoechst mais
le nombre de particules présentes dans les cellules diminue progressivement (figure 5.14 c-e).
172