Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...
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tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013<br />
Chapitre 5 : Nanoparticules <strong>de</strong> <strong>silice</strong> pour la libération intracellulaire <strong>de</strong> principes actifs<br />
dialysées pour retirer les molécules n’ayant pas réagi, la fluoresc<strong>en</strong>ce mesurée est donc due au<br />
marqueur Hoechst incorporé dans les particules <strong>de</strong> <strong>silice</strong>. Cette différ<strong>en</strong>ce d’int<strong>en</strong>sité peut être<br />
due à un nombre plus important <strong>de</strong> molécules Hoechst incorporées dans les particules 20%SS<br />
et 40%SS que dans les 0%SS. Ceci pourrait être le résultat <strong>de</strong> l’incorporation <strong>de</strong> Hoechst dans<br />
les "poches" organiques formées par les molécules du silane BTSPD con<strong>de</strong>nsé par un seul <strong>de</strong><br />
ses atomes <strong>de</strong> silicium.<br />
Les trois types <strong>de</strong> particules, 0%SS, 20%SS et 40%SS avec Hoechst, prés<strong>en</strong>t<strong>en</strong>t donc un<br />
diamètre et une charge <strong>de</strong> surface similaires dans le <strong>milieu</strong> <strong>de</strong> culture. Les différ<strong>en</strong>ces <strong>de</strong><br />
comportem<strong>en</strong>t que l’on pourra observer par la suite seront donc liées à la prés<strong>en</strong>ce <strong><strong>de</strong>s</strong> ponts<br />
disulfures et à l’év<strong>en</strong>tuelle modification <strong><strong>de</strong>s</strong> interactions <strong>de</strong> Hoechst 33258 avec la matrice <strong>de</strong><br />
<strong>silice</strong> <strong>en</strong> fonction <strong>de</strong> la composition <strong><strong>de</strong>s</strong> particules.<br />
5.4.2 LIBERATION DU MARQUEUR HOECHST 33258 DES PARTICULES DE SILICE<br />
La figure 5.14 prés<strong>en</strong>te le suivi par fluoresc<strong>en</strong>ce <strong>de</strong> la libération du marqueur Hoechst 33258<br />
<strong><strong>de</strong>s</strong> particules <strong>de</strong> <strong>silice</strong> 0%SS. Dans cette étu<strong>de</strong>, le signal bleu représ<strong>en</strong>te le marqueur<br />
Hoechst, le vert correspond toujours à la FITC (et donc initialem<strong>en</strong>t aux <strong>nanoparticules</strong>) et le<br />
signal rouge correspond à la membrane pour les clichés a et b et à un autre marqueur<br />
nucléaire (iodure <strong>de</strong> propidium) pour les autres clichés. Le double marquage du noyau (signal<br />
rose dû à la colocalisation <strong>de</strong> Hoechst et iodure <strong>de</strong> propidium) permet <strong>de</strong> s’assurer que le<br />
marqueur Hoechst libéré parvi<strong>en</strong>t bi<strong>en</strong> à <strong><strong>de</strong>s</strong>tination. On observe qu’après 6h d’incubation, il<br />
semble y avoir quelques particules dans la cellule mais le noyau n’apparaît pas comme<br />
marqué avec Hoechst (figure 5.14 a). C’est le cas à partir <strong>de</strong> 8 heures d’exposition (figure<br />
5.14 b). Pour <strong><strong>de</strong>s</strong> temps supérieurs, on constate que le noyau reste marqué avec Hoechst mais<br />
le nombre <strong>de</strong> particules prés<strong>en</strong>tes dans les cellules diminue progressivem<strong>en</strong>t (figure 5.14 c-e).<br />
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