Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...

tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013
Chapitre 5 : Nanoparticules de silice pour la libération intracellulaire de principes actifs
5.3.3 EXOCYTOSE ET DISSOLUTION INTRACELLULAIRE
L’étude précédente a montré que les particules peuvent rentrer dans les cellules. Leur
présence dans des vésicules intracellulaires suggère que l’internalisation se fait par un
mécanisme d’endocytose. Ce phénomène a été mis en évidence pour les particules sans pont
disulfure dans le chapitre 3 en utilisant des inhibiteurs des voies principales d’internalisation
(clathrine et caveolae). La même étude a été menée avec les particules n%SS mais ne conduit
pas à des résultats probants du fait du nombre limité de particules internalisées observables en
microscopie à fluorescence après 24 heures d’exposition.
Une fois l’internalisation mise en évidence, la question qui se pose ensuite est : que
deviennent les particules internalisées ? Pour répondre à cette question, nous avons exposé les
cellules pendant une semaine aux différentes particules n%SS. Puis, après rinçage, nous avons
mesuré, par fluorescence, l’évolution de la quantité de particules et de formes solubles
excrétées par les cellules. La figure 5.12 représente ces courbes d’évolution, exprimée en
pourcentage de l’intensité initiale, pour l’ensemble des particules n%SS étudiées. La première
constatation est que l’on observe une libération progressive des particules et des formes
solubles. Cependant, plus le taux de disulfure augmente plus la quantité de nanoparticules et
de formes solubles excrétées diminue, pour atteindre respectivement 2 et 4% dans le cas des
particules 40%SS.
En fonction du taux de disulfure, on observe deux types de comportement. Soit les cellules
excrètent majoritairement des particules, c’est les cas pour les particules 0%SS et dans une
moindre mesure pour les particules 10%SS pour lesquelles au-delà de 72 heures les deux
contributions sont similaires, soit les cellules excrètent plus de formes solubles que de
particules, c’est le cas pour les particules 30%SS et 40%SS. Ceci est en accord avec l’étude
de la réduction des ponts disulfures par le DTT. En effet, si les ponts disulfures sont réduits de
façon intracellulaire, les particules peuvent être fragilisées impliquant la production de plus de
formes solubles qui seront potentiellement excrétées.
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