Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...
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tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013<br />
Chapitre 5 : Nanoparticules <strong>de</strong> <strong>silice</strong> pour la libération intracellulaire <strong>de</strong> principes actifs<br />
5.2.3 BILAN<br />
Cette étu<strong>de</strong> a permis <strong>de</strong> montrer que l’introduction <strong>de</strong> ponts disulfures n’a pas d’inci<strong>de</strong>nce sur<br />
la dissolution à pH aci<strong>de</strong>. Cette <strong>de</strong>rnière est cep<strong>en</strong>dant, comme att<strong>en</strong>du, ral<strong>en</strong>tie par rapport à<br />
pH 7. Le pH r<strong>en</strong>contré dans les <strong>en</strong>dosomes puis les lysosomes aura donc comme seul effet <strong>de</strong><br />
ral<strong>en</strong>tir la dissolution <strong><strong>de</strong>s</strong> particules.<br />
Par contre, la prés<strong>en</strong>ce <strong>de</strong> ponts disulfures r<strong>en</strong>d les particules s<strong>en</strong>sibles à un <strong>en</strong>vironnem<strong>en</strong>t<br />
réducteur. En effet, bi<strong>en</strong> que ce soit un phénomène très étalé dans le temps, on observe<br />
l’oxydation <strong>de</strong> DTT <strong>en</strong> prés<strong>en</strong>ce <strong><strong>de</strong>s</strong> particules n%SS, ce qui traduit la réduction <strong><strong>de</strong>s</strong> ponts<br />
disulfures, seules espèces dans le <strong>milieu</strong> capables d’oxy<strong>de</strong>r le DTT. La différ<strong>en</strong>ce <strong>de</strong> taux <strong>de</strong><br />
disulfure ne modifie pas la réaction sur la première semaine d’étu<strong>de</strong>, par contre au-<strong>de</strong>là, on<br />
observe une différ<strong>en</strong>ce <strong>de</strong> comportem<strong>en</strong>t <strong>en</strong>tre les particules possédant plus ou moins <strong>de</strong> 20%<br />
<strong>de</strong> disulfures.<br />
5.3 Internalisation <strong><strong>de</strong>s</strong> <strong>nanoparticules</strong> et toxicité<br />
5.3.1 INTERNALISATION ET LOCALISATION INTRACELLULAIRE<br />
Lorsqu’on suit l’internalisation <strong><strong>de</strong>s</strong> particules n%SS dans les cellules exposées à une<br />
susp<strong>en</strong>sion à 0,6 mg/mL dans du <strong>milieu</strong> <strong>de</strong> culture, on constate que l’introduction <strong>de</strong> ponts<br />
disulfures modifie le processus. En effet, lorsqu’on regar<strong>de</strong> les cellules 24 heures après l’ajout<br />
<strong><strong>de</strong>s</strong> particules, on observe <strong><strong>de</strong>s</strong> particules 0%SS internalisées (figure 5.8 a). Lorsqu’on<br />
introduit <strong><strong>de</strong>s</strong> ponts disulfures, pour un taux <strong>de</strong> 10% il semble y avoir quelques poches<br />
d’internalisation <strong><strong>de</strong>s</strong> particules (figure 5.8 b). Lorsque le taux <strong>de</strong> disulfure augm<strong>en</strong>te, on<br />
n’observe plus <strong>de</strong> particules internalisées. Pour <strong><strong>de</strong>s</strong> taux <strong>de</strong> 20% et 30% on observe <strong><strong>de</strong>s</strong><br />
particules <strong>en</strong> interactions avec la membrane (figure 5.8 c-d), ce qui n’est plus le cas pour les<br />
particules 40%SS (figure 5.8 e). Après une semaine d’exposition, les particules sans ponts<br />
disulfures sont prés<strong>en</strong>tes dans <strong>de</strong> nombreuses vésicules aci<strong><strong>de</strong>s</strong> (signal bleu cyan dû à la<br />
colocalisation <strong>de</strong> la FITC et du Lysos<strong>en</strong>sor, figure 5.8 f). Les particules incorporant <strong><strong>de</strong>s</strong> ponts<br />
disulfures, quant à elles, sont visualisées dans <strong><strong>de</strong>s</strong> vésicules aci<strong><strong>de</strong>s</strong> mais <strong>en</strong> nombre plus<br />
restreint que les particules 0%SS (figure 5.8 g-j).<br />
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