Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...
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tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013<br />
Chapitre 4 : Diffusion <strong><strong>de</strong>s</strong> <strong>nanoparticules</strong> <strong>de</strong> <strong>silice</strong> dans un hydrogel <strong>de</strong> collagène<br />
Par ailleurs, pour <strong><strong>de</strong>s</strong> cellules immobilisées dans un gel à 3 mg/mL, on observe la prés<strong>en</strong>ce <strong>de</strong><br />
particules dans les cellules après 24 heures <strong>de</strong> diffusion pour l’<strong>en</strong>semble <strong><strong>de</strong>s</strong> particules testées<br />
Si+200, Si+60, Si+10 et Si-10. Après 24 heures les particules sembl<strong>en</strong>t donc internalisées<br />
dans les cellules, quelles que soi<strong>en</strong>t la taille ou la charge initiale <strong><strong>de</strong>s</strong> particules (figure 4.13 a-<br />
d)<br />
Enfin, lors <strong><strong>de</strong>s</strong> observations <strong>en</strong> microscopie à fluoresc<strong>en</strong>ce, on peut constater que les fibres <strong>de</strong><br />
collagène apparaiss<strong>en</strong>t comme marquées avec la fluorescéine. Ceci confirme l’adsorption <strong>de</strong><br />
<strong>nanoparticules</strong> et/ou d’espèces fluoresc<strong>en</strong>tes libérées par dissolution sur ces fibres, mise <strong>en</strong><br />
évi<strong>de</strong>nce lors <strong>de</strong> la modélisation <strong>de</strong> la diffusion.<br />
- Mécanisme d’internalisation<br />
Afin <strong>de</strong> déterminer si les particules sont internalisées par les cellules, les gels cont<strong>en</strong>ant les<br />
cellules sont incubés avec <strong><strong>de</strong>s</strong> inhibiteurs d’<strong>en</strong>docytose. Lorsque les cellules sont exposées<br />
aux <strong>nanoparticules</strong> <strong>en</strong> prés<strong>en</strong>ce d’inhibiteurs d’<strong>en</strong>docytose (voie clathrine et caveolae), on<br />
constate, <strong>en</strong> fonction <strong><strong>de</strong>s</strong> caractéristiques <strong><strong>de</strong>s</strong> particules, une modification <strong>de</strong> leur prés<strong>en</strong>ce<br />
intracellulaire.<br />
Pour les particules Si+200 et Si+60, l’inhibiteur <strong>de</strong> la voie clathrine (cadaverine) empêche<br />
effectivem<strong>en</strong>t la prés<strong>en</strong>ce <strong>de</strong> particules observables au niveau <strong><strong>de</strong>s</strong> cellules (figure 4.13 e-f) ;<br />
par contre <strong>en</strong> prés<strong>en</strong>ce <strong>de</strong> l’inhibiteur <strong>de</strong> la voie caveolae (filipine), on constate la prés<strong>en</strong>ce <strong>de</strong><br />
particules au niveau <strong>de</strong> la membrane cellulaire (coloration jaune due à la colocalisation <strong>de</strong> la<br />
fluorescéine et du marqueur membranaire) (figure 4.13 i-j). Pour les particules Si-10, on<br />
observe l’effet opposé : <strong>en</strong> prés<strong>en</strong>ce d’inhibiteur <strong>de</strong> la voie clathrine <strong><strong>de</strong>s</strong> particules sont<br />
observées au moins au niveau <strong>de</strong> la membrane cellulaire (figure 4.13 h) tandis qu’<strong>en</strong> prés<strong>en</strong>ce<br />
<strong>de</strong> l’inhibiteur <strong>de</strong> la voie caveolae, les cellules n’apparaiss<strong>en</strong>t qu’avec le marqueur<br />
membranaire (figure 4.13 l). Enfin, pour les particules Si+10 (figure 4.13 g et k), il est plus<br />
difficile <strong>de</strong> conclure quant à l’internalisation <strong><strong>de</strong>s</strong> particules <strong>en</strong> prés<strong>en</strong>ce d’inhibiteurs<br />
d’<strong>en</strong>docytose ; <strong>en</strong> prés<strong>en</strong>ce d’inhibiteur <strong>de</strong> la voie clathrine il semble y avoir internalisation <strong>de</strong><br />
particules tandis qu’<strong>en</strong> prés<strong>en</strong>ce d’inhibiteur <strong>de</strong> la voie caveolae on observe une colocalisation<br />
<strong>de</strong> la fluorescéine et du marqueur membranaire.<br />
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