Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...
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tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013<br />
Chapitre 4 : Diffusion <strong><strong>de</strong>s</strong> <strong>nanoparticules</strong> <strong>de</strong> <strong>silice</strong> dans un hydrogel <strong>de</strong> collagène<br />
graphique 4.11-a représ<strong>en</strong>te la co-localisation du signal <strong>de</strong> la FTIC et du Lysos<strong>en</strong>sor, la zone<br />
3 correspond à la colocalisation, les zones 1 et 2 correspon<strong>de</strong>nt aux <strong>de</strong>ux signaux. On constate<br />
ainsi que dans cette cellule, la fluorescéine et le Lysos<strong>en</strong>sor sont à 94% situés dans la même<br />
zone.<br />
Figure 4-12: Analyse <strong>de</strong> la colocalisation <strong><strong>de</strong>s</strong> signaux <strong>de</strong> fluoresc<strong>en</strong>ce <strong>de</strong> la FITC et du lysos<strong>en</strong>sor<br />
dans une cellule <strong>de</strong> l’échantillon H1,5c exposé 24h aux Si+60 (0,6 mg/mL dans du <strong>milieu</strong> <strong>de</strong><br />
culture), la zone 3 représ<strong>en</strong>te la colocalisation du signal <strong>de</strong> la fluorescéine et du Lysos<strong>en</strong>sor<br />
La même analyse effectuée sur <strong><strong>de</strong>s</strong> cellules immobilisées dans les gels à 1,5 ou 5 mg/mL<br />
exposées aux Si+60 donne une colocalisation similaire du signal <strong>de</strong> la fluorescéine avec le<br />
Lysos<strong>en</strong>sor (plus <strong>de</strong> 90%). Ces résultats indiqu<strong>en</strong>t que les particules sont prés<strong>en</strong>tes dans les<br />
vésicules aci<strong><strong>de</strong>s</strong> mises <strong>en</strong> évi<strong>de</strong>nce par le marqueur Lysos<strong>en</strong>sor.<br />
Il aurait été intéressant, pour aller plus loin dans la visualisation <strong><strong>de</strong>s</strong> particules internalisées <strong>de</strong><br />
pouvoir observer ces cellules <strong>en</strong> MET. Malheureusem<strong>en</strong>t, étant donnée la <strong>de</strong>nsité <strong>de</strong> cellules<br />
dans le gel, il est difficile d’obt<strong>en</strong>ir une coupe ultrafine cont<strong>en</strong>ant <strong><strong>de</strong>s</strong> cellules et malgré le<br />
nombre <strong>de</strong> coupes observées, nous n’avons pas pu obt<strong>en</strong>ir d’image <strong>de</strong> cellules <strong>en</strong> MET.<br />
Cep<strong>en</strong>dant, l’analyse par microscopie confocale nous r<strong>en</strong>seigne déjà sur l’internalisation <strong><strong>de</strong>s</strong><br />
particules. Par ailleurs, <strong>en</strong> comparant avec les cellules <strong>en</strong> exposition directe aux<br />
<strong>nanoparticules</strong>, nous avons obt<strong>en</strong>u <strong><strong>de</strong>s</strong> résultats similaires <strong>en</strong> microscopie confocal. Il est donc<br />
probable que l’internalisation dans les cellules immobilisées au sein <strong><strong>de</strong>s</strong> gels soit comparable<br />
à celle observée dans les cellules <strong>en</strong> exposition directe.<br />
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