Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...

tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013
Chapitre 4 : Diffusion des nanoparticules de silice dans un hydrogel de collagène
graphique 4.11-a représente la co-localisation du signal de la FTIC et du Lysosensor, la zone
3 correspond à la colocalisation, les zones 1 et 2 correspondent aux deux signaux. On constate
ainsi que dans cette cellule, la fluorescéine et le Lysosensor sont à 94% situés dans la même
zone.
Figure 4-12: Analyse de la colocalisation des signaux de fluorescence de la FITC et du lysosensor
dans une cellule de l’échantillon H1,5c exposé 24h aux Si+60 (0,6 mg/mL dans du milieu de
culture), la zone 3 représente la colocalisation du signal de la fluorescéine et du Lysosensor
La même analyse effectuée sur des cellules immobilisées dans les gels à 1,5 ou 5 mg/mL
exposées aux Si+60 donne une colocalisation similaire du signal de la fluorescéine avec le
Lysosensor (plus de 90%). Ces résultats indiquent que les particules sont présentes dans les
vésicules acides mises en évidence par le marqueur Lysosensor.
Il aurait été intéressant, pour aller plus loin dans la visualisation des particules internalisées de
pouvoir observer ces cellules en MET. Malheureusement, étant donnée la densité de cellules
dans le gel, il est difficile d’obtenir une coupe ultrafine contenant des cellules et malgré le
nombre de coupes observées, nous n’avons pas pu obtenir d’image de cellules en MET.
Cependant, l’analyse par microscopie confocale nous renseigne déjà sur l’internalisation des
particules. Par ailleurs, en comparant avec les cellules en exposition directe aux
nanoparticules, nous avons obtenu des résultats similaires en microscopie confocal. Il est donc
probable que l’internalisation dans les cellules immobilisées au sein des gels soit comparable
à celle observée dans les cellules en exposition directe.
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