Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...
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tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013<br />
Chapitre 4 : Diffusion <strong><strong>de</strong>s</strong> <strong>nanoparticules</strong> <strong>de</strong> <strong>silice</strong> dans un hydrogel <strong>de</strong> collagène<br />
différ<strong>en</strong>ts. En effet, lors <strong>de</strong> l’exposition directe, les cellules étai<strong>en</strong>t <strong>en</strong> contact 7 jours avec les<br />
particules avant le suivi <strong>de</strong> la dissolution intracellulaire. Dans l’étu<strong>de</strong> avec les gels <strong>de</strong><br />
collagène, le suivi s’arrête à 72 heures d’exposition et on ne mesure pas la libération <strong>de</strong><br />
formes solubles après rinçage. On peut donc faire l’hypothèse que ce phénomène <strong>de</strong><br />
dissolution intracellulaire est trop faible pour être mis <strong>en</strong> évi<strong>de</strong>nce pour les particules Si+60,<br />
Si±10, ou bi<strong>en</strong> que les formes solubles libérées n’ont pas le temps <strong>de</strong> traverser le gel. Par<br />
contre, la différ<strong>en</strong>ce observée sur la constante <strong>de</strong> dissolution appar<strong>en</strong>te <strong><strong>de</strong>s</strong> particules Si+200<br />
pourrait être due à un phénomène <strong>de</strong> dissolution intracellulaire <strong><strong>de</strong>s</strong> particules.<br />
4.2.3.3 Internalisation <strong><strong>de</strong>s</strong> particules et toxicité<br />
La prés<strong>en</strong>ce <strong>de</strong> cellules dans le gel implique <strong>de</strong> répondre aux <strong>de</strong>ux questions suivantes : les<br />
cellules internalis<strong>en</strong>t-elles les particules lors <strong>de</strong> leur diffusion ? les particules sont-elles<br />
toxiques pour les cellules immobilisées dans les gels <strong>de</strong> collagène ?<br />
Figure 4-11: Internalisation, suivie par microscopie à fluoresc<strong>en</strong>ce confocale, après 24 heures<br />
d’exposition, <strong><strong>de</strong>s</strong> particules Si+60 (0,6 mg/mL dans du <strong>milieu</strong> <strong>de</strong> culture) dans les cellules<br />
immobilisées dans les gels <strong>de</strong> collagène a) 1,5 mg/mL, b) 3 mg/mL, c) 5 mg/mL.<br />
- Localisation intracellulaire<br />
Afin <strong>de</strong> déterminer si les <strong>nanoparticules</strong> r<strong>en</strong>tr<strong>en</strong>t dans les cellules, après 24 heures <strong>de</strong><br />
diffusion <strong><strong>de</strong>s</strong> <strong>nanoparticules</strong>, nous avons observé <strong><strong>de</strong>s</strong> coupes <strong><strong>de</strong>s</strong> différ<strong>en</strong>ts gels. On constate<br />
qu’après 24 h, les particules Si+60 se retrouv<strong>en</strong>t à l’intérieur <strong><strong>de</strong>s</strong> cellules immobilisées dans<br />
les gels <strong>de</strong> collagène aux différ<strong>en</strong>tes conc<strong>en</strong>trations. L’analyse <strong><strong>de</strong>s</strong> images <strong>de</strong> fluoresc<strong>en</strong>ce<br />
montre que les signaux <strong>de</strong> la fluorescéine et du marqueur Lysos<strong>en</strong>sor sont co-localisés dans<br />
les cellules immobilisées dans un gel H3c, après 24 heures d’exposition aux <strong>nanoparticules</strong><br />
Si+60 (figures 4.11 et 4.12). L’image 4.11-b est un zoom d’une coupe d’une cellule<br />
immobilisée et permet <strong>de</strong> définir la zone <strong>de</strong> l’image sur laquelle calculer la co-localisation. Le<br />
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