Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...

tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013
Chapitre 4 : Diffusion des nanoparticules de silice dans un hydrogel de collagène
différents. En effet, lors de l’exposition directe, les cellules étaient en contact 7 jours avec les
particules avant le suivi de la dissolution intracellulaire. Dans l’étude avec les gels de
collagène, le suivi s’arrête à 72 heures d’exposition et on ne mesure pas la libération de
formes solubles après rinçage. On peut donc faire l’hypothèse que ce phénomène de
dissolution intracellulaire est trop faible pour être mis en évidence pour les particules Si+60,
Si±10, ou bien que les formes solubles libérées n’ont pas le temps de traverser le gel. Par
contre, la différence observée sur la constante de dissolution apparente des particules Si+200
pourrait être due à un phénomène de dissolution intracellulaire des particules.
4.2.3.3 Internalisation des particules et toxicité
La présence de cellules dans le gel implique de répondre aux deux questions suivantes : les
cellules internalisent-elles les particules lors de leur diffusion ? les particules sont-elles
toxiques pour les cellules immobilisées dans les gels de collagène ?
Figure 4-11: Internalisation, suivie par microscopie à fluorescence confocale, après 24 heures
d’exposition, des particules Si+60 (0,6 mg/mL dans du milieu de culture) dans les cellules
immobilisées dans les gels de collagène a) 1,5 mg/mL, b) 3 mg/mL, c) 5 mg/mL.
- Localisation intracellulaire
Afin de déterminer si les nanoparticules rentrent dans les cellules, après 24 heures de
diffusion des nanoparticules, nous avons observé des coupes des différents gels. On constate
qu’après 24 h, les particules Si+60 se retrouvent à l’intérieur des cellules immobilisées dans
les gels de collagène aux différentes concentrations. L’analyse des images de fluorescence
montre que les signaux de la fluorescéine et du marqueur Lysosensor sont co-localisés dans
les cellules immobilisées dans un gel H3c, après 24 heures d’exposition aux nanoparticules
Si+60 (figures 4.11 et 4.12). L’image 4.11-b est un zoom d’une coupe d’une cellule
immobilisée et permet de définir la zone de l’image sur laquelle calculer la co-localisation. Le
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