Comportement des nanoparticules de silice en milieu biologique ...
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tel-00836093, version 1 - 20 Jun 2013<br />
Chapitre 3 : Interactions <strong><strong>de</strong>s</strong> <strong>nanoparticules</strong> avec les cellules<br />
<strong>de</strong> 80 ± 30 nm (figure 3.13 c). Cette diminution <strong>de</strong> taille n’est pas due uniquem<strong>en</strong>t à la<br />
dissolution qui a lieu dans le <strong>milieu</strong> puisque si on regar<strong>de</strong> la taille <strong>de</strong> particules après 14 jours<br />
dans le <strong>milieu</strong> à 37°C, on observe bi<strong>en</strong> une partie <strong><strong>de</strong>s</strong> particules avec un diamètre plus faible<br />
mais il y a aussi une partie <strong>de</strong> la population <strong>de</strong> particules qui a un diamètre comparable au<br />
diamètre initial. Ceci implique que les particules subiss<strong>en</strong>t une dissolution intracellulaire et<br />
sont capables <strong>de</strong> ressortir <strong><strong>de</strong>s</strong> cellules. Par ailleurs, la structure interne <strong><strong>de</strong>s</strong> cellules ne semble<br />
pas modifiée par la prés<strong>en</strong>ce <strong><strong>de</strong>s</strong> particules, et on peut observer <strong>de</strong> nombreux organites<br />
(mitochondries, réticulum <strong>en</strong>doplasmique) indiquant leur bon fonctionnem<strong>en</strong>t.<br />
3.3.3 EXOCYTOSE DES PARTICULES OU DISSOLUTION INTRACELLULAIRE ?<br />
Afin <strong>de</strong> déterminer si les particules internalisées sont capables <strong>de</strong> ressortir <strong><strong>de</strong>s</strong> cellules ou si<br />
elles sont dégradées <strong>de</strong> façon intracellulaire, après une semaine d’exposition, les cellules ont<br />
été rincées et le <strong>milieu</strong> changé tous les jours pour mesurer l’int<strong>en</strong>sité <strong>de</strong> fluoresc<strong>en</strong>ce totale<br />
ainsi que celle <strong><strong>de</strong>s</strong> formes solubles, obt<strong>en</strong>ues par séparation <strong><strong>de</strong>s</strong> <strong>nanoparticules</strong> du reste du<br />
<strong>milieu</strong> (c<strong>en</strong>trifugation dans un tube avec un seuil <strong>de</strong> rét<strong>en</strong>tion <strong>de</strong> 3 kD). On observe une<br />
libération progressive <strong>de</strong> particules et <strong>de</strong> formes solubles pour toutes les particules étudiées<br />
(figure 3.14).<br />
Toutefois, il faut distinguer <strong>de</strong>ux types <strong>de</strong> comportem<strong>en</strong>t selon que les particules sont<br />
initialem<strong>en</strong>t positives ou négatives. En effet, on a vu dans le chapitre précé<strong>de</strong>nt que lorsque<br />
les particules sont mises <strong>en</strong> susp<strong>en</strong>sion dans le <strong>milieu</strong>, leur charge <strong>de</strong> surface est modifiée par<br />
l’adsorption <strong>de</strong> protéines. Ainsi les particules initialem<strong>en</strong>t positives voi<strong>en</strong>t-elles leur charge<br />
écrantée et apparaiss<strong>en</strong>t légèrem<strong>en</strong>t négatives. A l’inverse, les particules initialem<strong>en</strong>t<br />
négatives rest<strong>en</strong>t bi<strong>en</strong> négatives.<br />
On observe que plus les particules sont petites, plus la contribution <strong><strong>de</strong>s</strong> formes solubles au<br />
signal <strong>de</strong> fluoresc<strong>en</strong>ce est faible. Ainsi les formes solubles, pour les particules Si+200,<br />
contribu<strong>en</strong>t-elles pour <strong>en</strong>viron 2/3 du signal <strong>de</strong> fluoresc<strong>en</strong>ce et les particules pour seulem<strong>en</strong>t<br />
1/3 du signal. Pour les particules Si+60, la libération <strong><strong>de</strong>s</strong> particules et <strong><strong>de</strong>s</strong> formes solubles suit<br />
une t<strong>en</strong>dance similaire avec une contribution majoritaire <strong><strong>de</strong>s</strong> formes solubles. Enfin, dans le<br />
cas <strong><strong>de</strong>s</strong> particules Si+10 il y a très peu <strong>de</strong> libération d’espèces fluoresc<strong>en</strong>tes (particules ou<br />
formes solubles) sans différ<strong>en</strong>ce notable <strong>en</strong>tre les <strong>de</strong>ux contributions. Dans le cas <strong><strong>de</strong>s</strong><br />
particules Si-10, on observe un signal <strong>de</strong> fluoresc<strong>en</strong>ce composé à <strong>en</strong>viron 90% <strong>de</strong> particules et<br />
très peu <strong>de</strong> formes solubles libérées dans le <strong>milieu</strong>.<br />
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