International Journal of Mediterranean Ecology - Ecologia ...

gazeuse (Chrompack CHROM 3 – CP 9001).
Le chromatographe était équipé d’un détecteur
TCD et d’une colonne remplie (Porapack)
dans laquelle circule de l’hélium à un flux de
60 mL.h-1 . Les valeurs obtenues ont été ajustées
à 22 oC en accord avec la loi des gaz parfaits
à Q10 = 2. Les concentrations ambiantes
en CO2 ont été soustraites aux concentrations
en CO2 mesurées après incubation pour obtenir
la quantité de CO2 produite par les microorganismes
hétérotrophes contenus dans
l’échantillon.
La biomasse microbienne a été estimée par la
méthode de respiration induite par ajout de
glucose (Anderson & Domsch 1978). Un
mélange de talc et de glucose (1 000 µg C g-1 sol) a été ajouté aux dix grammes (équivalent
sec) de sol. Une incubation de 100 minutes a
été réalisée pour atteindre un taux maximal de
respiration induite. Les flacons ont été fermés
avec un bouchon hermétique immédiatement
après le remplacement (4 minutes) de leur
atmosphère interne par une atmosphère de
concentration stable en CO2 , puis incubés
90 minutes à 22 oC. La concentration en CO2 des flacons a été analysée par chromatographie
en phase gazeuse et corrigée de la même
manière que décrite précédemment pour la
respiration basale. Les taux de respiration
induite ont été convertis en valeur de biomasse
microbienne en utilisant l’équation
donnée par Beare et al. (1990).
Activité des FDA hydrolases (FDAse)
L’activité FDA hydrolase permet d’évaluer
l’activité d’une large gamme d’enzymes (e.g.
estérases, protéases, lipases, cutinases) impliquées
dans l’hydrolyse de molécules carbonées.
L’activité FDAse a été mesurée selon la
méthode modifiée de Green et al. (2006).
Quatre mL de tampon phosphate de potassium
à 60 mM (pH 7) plus 50 µL de solution
de fluorescéine diacétate (2 mg/mL d’acétone)
ont été ajoutés à 1 g de sol frais et incubés
à 30 o C pendant 1 heure. La réaction a été
arrêtée en ajoutant 2 mL d’acétone et le
mélange a été immédiatement centrifugé pendant
2 minutes à 12 000 g (4 o C). La fluorescéine
libérée à partir de la FDA a été mesurée
dans le surnageant à 490 nm. Pour chaque
échantillon, un témoin est réalisé dans des
conditions identiques en remplaçant le tampon
contenant le substrat par le tampon seul.
L’activité FDA hydrolase est exprimée en
µmole de fluorescéine libérée par minute (U)
et par gramme de sol sec (U.g -1 ).
ecologia mediterranea – Vol. 38 (1) – 2012
Reconstitution post-incendie des propriétés physico-chimiques et microbiologiques
de sols forestiers algériens (forêt de Fénouane, wilaya de Saïda)
Activité des uréases (Ur)
Les uréases sont des enzymes impliquées
dans le cycle de l’azote. L’activité Ur a été
évaluée selon la méthode adaptée de Tabatabai
& Bremmer (1972). Dans un tube à essai,
1 g de sol frais a été pesé puis mélangé avec
6 mL de tampon acétate de sodium (50 mM,
pH 6) contenant 20 mM d’urée. Le milieu
réactionnel a été incubé pendant 2 heures
(37 o C) puis centrifugé (2 mn, 4 o C, 12 000 g).
La quantité d’ammonium (N-NH 4 + ) libéré par
les uréases a été quantifiée par la méthode de
Mulvaney (1996). Pour chaque échantillon,
un témoin est réalisé dans des conditions
identiques en remplaçant le tampon contenant
le substrat par le tampon seul. L’activité Ur
est exprimée en µmole de N-NH 4 + libéré par
minute (U) et par gramme de sol sec (U.g -1 ).
Activité des phosphomonoestérases
alcalines (PMB)
Les phosphomonoestérases alcalines sont des
enzymes impliquées dans le cycle du phosphore.
L’activité PMB a été mesurée selon la
méthode de Tabatabai & Bremner (1969). Le
milieu réactionnel est constitué de 1 g de sol
frais, de 5 mL de tampon NaOH-glycine
(0,1 M, pH 9,0) plus 1 mL d’une solution
de p-nitrophényl phosphate (pNPP, 5 mM,
NaOH-glycine à 0,1 M et pH 9,0). Après une
incubation de 1 h à 30 o C, la réaction a été
arrêtée par l’ajout de 1 mL de CaCl 2 (0,5 M)
et 4 mL de NaOH (0,5 M). Après une centrifugation
de 2 minutes à 12 000 g, la quantité
de p-nitrophénol (p-NP) libérée à partir du
p-NPP a été mesurée sur le surnageant à
412 nm. Pour chaque échantillon, un témoin
est réalisé dans des conditions identiques en
remplaçant la solution p-NPP par 1 mL de
tampon acétate seul. Les activités PMA et PMB
sont exprimées en µmole de p-NP libéré par
minute (U) et par gramme de sol sec (U.g -1 ).
Activité des phénol-oxydases (PO)
Les enzymes de type phénol-oxydase sont
impliquées dans la transformation des composés
organiques aromatiques (lignine, phénols,
charbon) et sont principalement d’origine
fongique (Baldrian 2006). L’activité PO
de type tyrosinase (EC 1.14.18.1) a été mesurée
en utilisant le protocole de Saiya-Cork et
al. (2002). Le milieu réactionnel est constitué
de 0,5 g de sol frais et de 6 mL d’une solution
de L-Dopa (3,4 dihydroxyphénylalanine,
εM = 620 L.mol -1 .cm -1 ) à 25 mM dans un
65