International Journal of Mediterranean Ecology - Ecologia ...
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gazeuse (Chrompack CHROM 3 – CP 9001).<br />
Le chromatographe était équipé d’un détecteur<br />
TCD et d’une colonne remplie (Porapack)<br />
dans laquelle circule de l’hélium à un flux de<br />
60 mL.h-1 . Les valeurs obtenues ont été ajustées<br />
à 22 oC en accord avec la loi des gaz parfaits<br />
à Q10 = 2. Les concentrations ambiantes<br />
en CO2 ont été soustraites aux concentrations<br />
en CO2 mesurées après incubation pour obtenir<br />
la quantité de CO2 produite par les microorganismes<br />
hétérotrophes contenus dans<br />
l’échantillon.<br />
La biomasse microbienne a été estimée par la<br />
méthode de respiration induite par ajout de<br />
glucose (Anderson & Domsch 1978). Un<br />
mélange de talc et de glucose (1 000 µg C g-1 sol) a été ajouté aux dix grammes (équivalent<br />
sec) de sol. Une incubation de 100 minutes a<br />
été réalisée pour atteindre un taux maximal de<br />
respiration induite. Les flacons ont été fermés<br />
avec un bouchon hermétique immédiatement<br />
après le remplacement (4 minutes) de leur<br />
atmosphère interne par une atmosphère de<br />
concentration stable en CO2 , puis incubés<br />
90 minutes à 22 oC. La concentration en CO2 des flacons a été analysée par chromatographie<br />
en phase gazeuse et corrigée de la même<br />
manière que décrite précédemment pour la<br />
respiration basale. Les taux de respiration<br />
induite ont été convertis en valeur de biomasse<br />
microbienne en utilisant l’équation<br />
donnée par Beare et al. (1990).<br />
Activité des FDA hydrolases (FDAse)<br />
L’activité FDA hydrolase permet d’évaluer<br />
l’activité d’une large gamme d’enzymes (e.g.<br />
estérases, protéases, lipases, cutinases) impliquées<br />
dans l’hydrolyse de molécules carbonées.<br />
L’activité FDAse a été mesurée selon la<br />
méthode modifiée de Green et al. (2006).<br />
Quatre mL de tampon phosphate de potassium<br />
à 60 mM (pH 7) plus 50 µL de solution<br />
de fluorescéine diacétate (2 mg/mL d’acétone)<br />
ont été ajoutés à 1 g de sol frais et incubés<br />
à 30 o C pendant 1 heure. La réaction a été<br />
arrêtée en ajoutant 2 mL d’acétone et le<br />
mélange a été immédiatement centrifugé pendant<br />
2 minutes à 12 000 g (4 o C). La fluorescéine<br />
libérée à partir de la FDA a été mesurée<br />
dans le surnageant à 490 nm. Pour chaque<br />
échantillon, un témoin est réalisé dans des<br />
conditions identiques en remplaçant le tampon<br />
contenant le substrat par le tampon seul.<br />
L’activité FDA hydrolase est exprimée en<br />
µmole de fluorescéine libérée par minute (U)<br />
et par gramme de sol sec (U.g -1 ).<br />
ecologia mediterranea – Vol. 38 (1) – 2012<br />
Reconstitution post-incendie des propriétés physico-chimiques et microbiologiques<br />
de sols forestiers algériens (forêt de Fénouane, wilaya de Saïda)<br />
Activité des uréases (Ur)<br />
Les uréases sont des enzymes impliquées<br />
dans le cycle de l’azote. L’activité Ur a été<br />
évaluée selon la méthode adaptée de Tabatabai<br />
& Bremmer (1972). Dans un tube à essai,<br />
1 g de sol frais a été pesé puis mélangé avec<br />
6 mL de tampon acétate de sodium (50 mM,<br />
pH 6) contenant 20 mM d’urée. Le milieu<br />
réactionnel a été incubé pendant 2 heures<br />
(37 o C) puis centrifugé (2 mn, 4 o C, 12 000 g).<br />
La quantité d’ammonium (N-NH 4 + ) libéré par<br />
les uréases a été quantifiée par la méthode de<br />
Mulvaney (1996). Pour chaque échantillon,<br />
un témoin est réalisé dans des conditions<br />
identiques en remplaçant le tampon contenant<br />
le substrat par le tampon seul. L’activité Ur<br />
est exprimée en µmole de N-NH 4 + libéré par<br />
minute (U) et par gramme de sol sec (U.g -1 ).<br />
Activité des phosphomonoestérases<br />
alcalines (PMB)<br />
Les phosphomonoestérases alcalines sont des<br />
enzymes impliquées dans le cycle du phosphore.<br />
L’activité PMB a été mesurée selon la<br />
méthode de Tabatabai & Bremner (1969). Le<br />
milieu réactionnel est constitué de 1 g de sol<br />
frais, de 5 mL de tampon NaOH-glycine<br />
(0,1 M, pH 9,0) plus 1 mL d’une solution<br />
de p-nitrophényl phosphate (pNPP, 5 mM,<br />
NaOH-glycine à 0,1 M et pH 9,0). Après une<br />
incubation de 1 h à 30 o C, la réaction a été<br />
arrêtée par l’ajout de 1 mL de CaCl 2 (0,5 M)<br />
et 4 mL de NaOH (0,5 M). Après une centrifugation<br />
de 2 minutes à 12 000 g, la quantité<br />
de p-nitrophénol (p-NP) libérée à partir du<br />
p-NPP a été mesurée sur le surnageant à<br />
412 nm. Pour chaque échantillon, un témoin<br />
est réalisé dans des conditions identiques en<br />
remplaçant la solution p-NPP par 1 mL de<br />
tampon acétate seul. Les activités PMA et PMB<br />
sont exprimées en µmole de p-NP libéré par<br />
minute (U) et par gramme de sol sec (U.g -1 ).<br />
Activité des phénol-oxydases (PO)<br />
Les enzymes de type phénol-oxydase sont<br />
impliquées dans la transformation des composés<br />
organiques aromatiques (lignine, phénols,<br />
charbon) et sont principalement d’origine<br />
fongique (Baldrian 2006). L’activité PO<br />
de type tyrosinase (EC 1.14.18.1) a été mesurée<br />
en utilisant le protocole de Saiya-Cork et<br />
al. (2002). Le milieu réactionnel est constitué<br />
de 0,5 g de sol frais et de 6 mL d’une solution<br />
de L-Dopa (3,4 dihydroxyphénylalanine,<br />
εM = 620 L.mol -1 .cm -1 ) à 25 mM dans un<br />
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