Thèse Amandine Martin - EPHE
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Le lipide A utilisé dans notre étude est L’OM‐174, un analogue de lipide A chimiquement défini, hautement purifié à partir d’une souche mutante d’Escherichia coli produite par les laboratoires OM Pharma (Meyrin, Suisse). Ce lipide A est une di‐glucosamine comportant 3 chaînes d’acides gras (2 acides hydroxymyristiques fixés chacun sur un groupement amine et un acide laurique) et deux groupements phosphates 137 . 2. Voie de signalisation des lipides A a) Récepteurs et protéines de la voie de signalisation Les récepteurs Toll‐Like sont uniques dans leur capacité à reconnaître les PAMPs des divers produits microbiens, incluant les lipides A. Il a été montré que les lipides A activaient les cellules via le récepteur TLR4, probablement via également le récepteur TLR2 et par l’intermédiaire de complexes formés avec les protéines LBP, CD14 et MD‐2. LBP et CD14 : La LBP pour « LPS binding protein » a été la première molécule découverte associée au lipide A, il s’agit d’une protéine de transport de lipides. La protéine CD14 est ancrée à la membrane par un glycosylphosphatidylinositol (GPI), elle est préférentiellement exprimée à la surface des cellules myéloïdes matures (cellules phagocytaires par exemple) 138 . Elle initie la transduction du signal du lipide A. Le CD14 fixé à la membrane peut lier le lipide A en absence de LBP, cependant la LBP augmente son affinité. Ce récepteur CD14 existe également sous forme soluble et peut se fixer sur des cellules qui en sont déficientes, comme les cellules endothéliales. La fixation du lipide A sur CD14 induit la translocation nucléaire de NF‐B et la libération du facteur de transcription c‐Rel codant des cytokines pro‐inflammatoires comme l'IL‐6 139 . De plus, cette fixation induit aussi l'expression de la NOS II (NO‐synthase inductible) et de l'IL‐1 des macrophages péritonéaux, alvéolaires et des monocytes du sang périphérique chez le rat 140 . Enfin, l’importance de CD14 dans la réponse au lipide A a été démontrée dans des souris déficiente en CD14, montrant une diminution de la réponse au lipide A 141 . De plus, l’utilisation d'anticorps dirigés contre le CD14 inhibe la capacité des lipides A à stimuler les 30
cellules phagocytaires (inhibition de la production de TNF‐) ainsi que les cellules endothéliales 138, 142 . CD14 n’a pas le domaine transmembranaire requis pour l’activation cellulaire. Le complexe LPS‐LBP‐CD14 requiert donc un récepteur supplémentaire pour transduire le signal de la membrane au cytoplasme. CD14 transfert le signal à d’autres protéines transmembranaires, notamment à TLR4, et à un moindre degré TLR2. TLR4 Les TLR sont codés par dix gènes chez l’homme et douze chez la souris 143, 144 . Chaque TLR reconnaît des PAMPs variés 143, 145 , leur activation induit la production de cytokines proinflammatoires (IL‐1, IL‐6, TNF‐), de chimiokines (CCL‐20, IL‐8, RANTES), de molécules cytotoxiques (NO et défensine) et l’expression de molécules de co‐stimulation (CD86, CD80, B7.1 et B7.2) 145, 146, 147 . Les souris de souche C3H/HeJ sont connues depuis plus de 30 ans pour leur absence de réponse aux LPS. Cette déficience a été corrélée à la présence d’une mutation au niveau d’un gène nommé Lps 148 . Beaucoup plus tard, il a été mis en évidence que ce gène Lps correspondait à la forme mutée du gène TLR4 149 . La génération de souris déficientes en TLR4 a peu de temps après confirmé l’implication du TLR4 dans la reconnaissance des LPS 150 . TLR4 reconnaît non seulement le lipide A mais aussi différents ligands comme par exemple le taxol 151 , HSP 60 (Heat Shock Protein) 152 , HSP 70 153 ou le hyaluronane 154, 155 . Les LPS et le lipide A sont des immuno‐stimulateurs, donc TLR4 peut être activé par de petites quantités de lipide A. Le récepteur TLR4 est requis, mais cependant n’est pas suffisant pour induire une réponse vis à vis du lipide A. MD‐2 : L’association de la protéine MD‐2 au domaine extracellulaire du TLR4 est nécessaire à une activation optimale du TLR4 155, 156 . MD‐2 se trouve principalement sous forme soluble, mais un domaine intra‐membranaire a été identifié dans sa séquence. Même si une interaction directe MD‐2/Lipide A a été décrite, la fonction de MD‐2 est mal connue. Le lipide A est transféré au complexe TLR4/MD‐2 par CD14 et interagit avec les 3 composants 31
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Le lipide A utilisé dans notre étude est L’OM‐174, un analogue de lipide A chimiquement<br />
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Les récepteurs Toll‐Like sont uniques dans leur capacité à reconnaître les PAMPs des<br />
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LBP et CD14 :<br />
La LBP pour « LPS binding protein » a été la première molécule découverte associée<br />
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La protéine CD14 est ancrée à la membrane par un glycosylphosphatidylinositol (GPI), elle<br />
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des macrophages péritonéaux, alvéolaires et des monocytes du sang périphérique chez le rat<br />
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