Thèse Amandine Martin - EPHE

UNIVERSITÉ DE BOURGOGNE & ÉCOLE PRATIQUE DES HAUTES ÉTUDES
U.F.R. DE MÉDECINE SCIENCES DE LA VIE ET DE LA TERRE
MINISTÈRE DE L’ENSEIGNEMENT SUPÉRIEUR ET DE LA RECHERCHE
THÈSE
POUR OBTENIR LE TITRE DE
DOCTEUR DE L’UNIVERSITÉ DE BOURGOGNE ET
DE L’ÉCOLE PRATIQUE DES HAUTES ÉTUDES
DISCIPLINE : IMMUNOLOGIE
PRÉSENTÉE ET SOUTENUE PUBLIQUEMENT LE 17 JUIN 2011
PAR
AMANDINE MARTIN
IMMUNOTHÉRAPIE PAR L’OM-174 SEUL OU EN COMBINAISON AVEC
L’OXALIPLATINE DANS UN MODÈLE DE CANCER COLIQUE CHEZ LE RAT
MEMBRES DU JURY :
MME FREDERIQUE PENAULT-LLORCA RAPPORTEUR
M. YVES DELNESTE RAPPORTEUR
M. JEAN-MARC CAVAILLON EXAMINATEUR
MME. THI MY ANH NEILDEZ EXAMINATEUR
M. JEAN-FRANÇOIS JEANNIN CO-DIRECTEUR DE THÈSE
MME CATHERINE PAUL CO-DIRECTRICE DE THESE
Laboratoire EPHE « Immunologie et Immunotherapie des tumeurs »
Faculté de médecine Directeur de thèse : Jeannin Jean-François
7 Bd Jeanne d’Arc jean-francois.jeannin@u-bourgogne
21000 Dijon Co-directrice de thèse : Paul Catherine
catherine.Paul@u-bourgogne.fr
1

Immunothérapie par l’OM-174 seul, ou en combinaison avec l’oxaliplatine dans un
modèle de cancer colique chez le rat
Résumé
Afin d’adapter et d’améliorer les traitements par immunothérapie dans les cancers humains, il est
nécessaire de comprendre comment est induit la mort des cellules tumorales. L’immunothérapie par
un lipide A, l’OM‐174, qui a été développé dans le laboratoire, est très efficace et induit la guérison
de 95% de rats porteurs de carcinomatoses coliques.
Dans ce projet, nous avons démontré que les neutrophiles pouvaient jouer un rôle important dans la
régression tumorale. En effet, ils sont capables de tuer des cellules tumorales via l’expression et la
sécrétion de granzyme B induit par les cytokines du microenvironnement tumoral et l’OM‐174.
Lorsque le traitement commence plus tard après l’injection des cellules cancéreuses (J21) et
s’adresse à des tumeurs volumineuses, l’efficacité de l’OM‐174 décroît. Cependant, l'association
oxaliplatine + OM‐174 rétabli cette efficacité, en induisant la guérison de 95% des rats porteurs de
ces carcinomatoses avancées. Nous avons démontré que cette combinaison induisait principalement
une forte augmentation de l’expression de chimioattractants (CXCL) des neutrophiles mais
également d’autres cellules immunitaires, des cytokines de l’inflammation et de la NOS II. Ces
résultats ont été corrélés au recrutement de neutrophiles, macrophages, cellules dendritiques
exprimant la NOS II, et au recrutement de lymphocytes T. L’OM‐174 induit donc une activation
importante du système immunitaire qui est augmentée par l’oxaliplatine.
Mots clés : cancer colique, OM‐174, immunothérapie, oxaliplatine, neutrophiles, granzyme B, CXCL.
Immunotherapy by OM-174 alone or in combination with oxaliplatin in a colon
cancer model in rat
Abstract
To adapt and improve treatment by immunotherapy in human cancers, it is necessary to understand
how induces tumor cell death. Immunotherapy by a lipid A, OM‐174, which was developed in the
laboratory, is highly effective and induces the cure of 95% of rats bearing colon carcinomatoses.
In this project, we demonstrated that neutrophils could play an important role in tumor regression.
Indeed, they are able to kill tumor cells via the expression and secretion of granzyme B induced by
the tumor microenvironment cytokines and OM‐174.
The efficacy of OM‐174 decreases when treatment starts later after injection of cancer cells (J21) and
is intended for large tumors. However, oxaliplatin + OM‐174 combination restored the effectiveness.
This combination induces the cure of 95% of these rats with advanced carcinomatoses. We
demonstrated that this combination induced mainly a strong increase in the expression of
neutrophils chemoattractant (CXCL) but also other immune cells, inflammatory cytokines and NOS II.
These results were correlated to the recruitment of neutrophils, macrophages, dendritic cells
expressing NOS II, and recruitment of T cells. OM‐174 induces a significant activation of the immune
system, which is increased by oxaliplatin.
Keyword: colon cancer, OM‐174, immunotherapy, oxaliplatin, neutrophils, granzyme B, CXCL.
2

Liste des abréviations
Liste des figures
INTRODUCTION
I. Le cancer colorectal
1. Généralités
SOMMAIRE
2. Cancer et santé publique
3. Epidémiologie du cancer colorectal
4. Transformation cellulaire/développement tumoral
5. Classification TNM (Tumeurs, Nodules, Métastases)
B. Traitements
1. Chirurgie
2. Chimiothérapie
3. L’immunothérapie
II. Immunité et cancer
A. Immunité innée
1. Généralités sur le système immunitaire inné
2. Les récepteurs du système immunitaire inné
3. Les cellules du système immunitaire inné
a) Les neutrophiles
b) Les macrophages
c) Les cellules Natural Killer
d) Les cellules myéloïdes suppressives
e) Les cellules dendritiques
3

III. Lipides A et immunothérapie
A. Immunothérapie non spécifique
B. Immunothérapie par les lipides A
Objectif du travail
1. Historique
2. Voie de signalisation des lipides A
a) Récepteurs et protéines de la voie de signalisation
b) Voie de signalisation de TLR4
3. Lipides A et immunité antitumorale
a) Réponses immunitaires générales induites par le lipide A
b) Effets du lipide A sur l’immunité antitumorale
4. Immunothérapie par des lipides A
5. Immunothérapie par l’OM-174
4

5-FU: 5-Fluorouracile
A
LISTE DES ABREAVIATIONS
ADCC: Antibody dependent cellular cytotoxicity
ADN: acide desoxyribonucléotique
ADNc: ADN complémentaire
AEC : 3-amino-9-ethylcarbazole
AG: aminoguanidine
AP-1: activator protein-1
ARG-1: Arginase-1
ARN: acide ribonucleique
ARNc: ARN complémentaire
ARNm: ARN messager
B
BCG: Bacille de Calmette et Guérin
BET: Bromure d’éthidium
BSA: Bovine serum albumine
C
CCL: Chemokine Ligand
CCR: chemokine (C-C motif) receptor
CINC: cytokine-induced neutrophil chemoattractant
CLR: Lectines C
CMH: Complexe majeur d’histocompatibilité
CNTF: Ciliary Neurotrophic Factor
5

CPA: Cellules présentatrices d’antigènes
CPT-11: Irinotecan
CSC: Cancer stem cells
CTL: Lymphocyte T cytotoxique
CXCL: CXC chemokine ligand
CXCR: CXC chemokine receptor
D
DAMP: Danger-associated molecular pattern
DAPI: 4’,6-diamidino-2-phenylindole
DC: Cellule dendritique
DNase: désoxyribonucléase
dNTP :
DO: densité optique
E
EGF: Epidermal growth factor
EDTA: acide éthylène diamine tétraacétique
E.L.I.S.A: Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay
F
FasL: Fas ligand
fMLP: peptides formylés
Folfox: oxaliplatine / 5-Fluorouracile / acide folinique
G
GAPDH: glycéraldéhyde-3-phosphate deshydrogénase
GM-CSF: Granulocyte macrophage colony stimulating factor
6

GPI: glycosylphosphatidylinositol
GRO: growth-regulated protein
GZMB: Granzyme B
H
H: heure
H2O2: peroxyde d’hydrogène
HAM’S:
HBSS: Hank’s balanced salt solution
HCl: Acide chlorhydrique
HES: Hémalun Eosine Safran
HMGB1: high-mobility group box 1
HRP: horseradish peroxydase
HSP: Heat shock protein
I
ICAM: Intercellular adhesion molecule
IFN : Interferon
Ig: immunoglobuline
IHF: immunohistofluorescence
IL: interleukine
IL-1R: interleukin-1 receptor
iNOS: NO synthase inductible
IRAK: interleukin-1 receptor associated kinase
IRF: interferon responsive factor
I.P: intrapéritonéale
I.V: intraveineuse
7

J
J: jour
K
KHCO3: Bicarbonate de potassium
KO: knock-out
L
LAK: Lymphokine activated killer cells
LBP: LPS binding protein
LFA: Leucocyte function associated antigen
LIX: Lipopolysaccharide-Induced CXC Chemokine
LPS: lipopolisaccharides
LRR: Leucine-rich repeats
LT: leucotriène
M
MAPK: mitogen-activated protein kinase kinase
MDSC: myeloid-derived suppressor cells
MgCl2: Chlorure de magnésium
MGG: May-Grünwald Giemsa
Min: minute
MIG: monokine induced by gamma-interferon
MIP: Macrophage Inflammatory Protein
MMP: Matrix metallopeptidase
MPL: Monophosphoryl lipid A
MyD88: myeloid differentiation factor-88
N
8

NaCl: Chlorure de sodium
NaNO2: Sodium de nitrite
NF-κB: nuclear factor κb
NH4Cl: Chlorure d’ammonium
NK: Natural killer
NO: Monoxyde d’azote
NO2 - : Nitrites
NOS: NO synthase
NP-40: Nonidet p40 (nonylphenoxy polyethoxy ethanol)
O
OCT: Tissu Teck
P
PA : Plasminogène
PAI: inhibiteurs de l’activateur du plasminogène
PAMP: Pathogen-associated molecular pattern
PAF: Platelet-activating factor
PBMC: Peripheral blood mononuclear cell
PBS: phosphate buffer solution
PBS-T: PBS-Tween
PCR: polymerase chain reaction
PMN: Polymorphonuclear
PRR: Pathogen recognition receptor
PSA: pénicilline / streptomycine / amphoctericine
PSGL: P-sélectine ligand
PVDF: Di-fluorure de polyvinyle
9

R
RANTES: regulated upon activation, normal T cell expressed and secreted
RNase: ribonucléase
ROS: Reactive oxygen species
RT-PCR: reverse transcription- polymerase chain reaction
S
SAB: serum albumine bovine
SDS: sodium dodecyl sulfate
SDS-PAGE: Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophorese
SEM: Standard Error of the Mean
SRN: Sérum de rat normal
SVF: serum de veau fœtal
T
TAE: tris-acétate-EDTA
TdT: Terminal Deoxynucleotidyl Transferase
TGF-β: tumor growth factor β
Th: Lymphocyte T helper
TIMP: Tissue Inhibitor of Metalloproteinases
TIR: toll interleukin-1 receptor
TIRAP: TIR domain containing adapter protein
TLR: toll like receptor
TNM: Tumeurs, Nodules, Métastases
TNF: tumor necrosis factor
TNF-R: TNF-receptor
10

I. Le cancer colorectal
A. Généralités
INTRODUCTION
1. Cancer et santé publique
La lutte contre le cancer en France est devenue une priorité gouvernementale depuis
2003 en faisant l’objet de deux «Plan Cancer» successifs. Le premier « Plan Cancer 2003‐
2007 » se déclinait en 70 propositions regroupées en 6 chapitres : « prévenir, dépister,
soigner, accompagner, enseigner, comprendre et découvrir », suivi du « Plan cancer 2009‐
2013 » qui s’inscrit dans la continuité du précédent. Il se décline en 30 propositions
regroupées en 5 axes : « recherche, observation, prévention‐dépistage, soins, vivre pendant
et après un cancer ». En 2009, les grandes tendances et les évolutions survenues depuis
2007 ont fait l’objet d’un rapport publié par l’Institut National du Cancer 1 . Ainsi, l’analyse
des chiffres montre qu’en 2005, le nombre de nouveaux cas de cancers a été estimé à près
de 320 000 dont 180 000 chez les hommes et 140 000 chez les femmes. Ce nombre a
augmenté de 89 % entre 1980 et 2005 alors que le nombre de décès n’a augmenté que de
13 %. Le cancer du côlon est le second cancer en termes de fréquence chez la femme (après
le cancer du sein) et le troisième chez l’homme (après le cancer du poumon et la prostate).
2. Epidémiologie du cancer colorectal
Chaque année, environ un million de nouveaux cas de cancer colorectaux sont
diagnostiqués dans le monde, et plus de 500 000 décès par an 2, 3, 4 . Avec les progrès des
nouvelles thérapies, de nombreux cancers sont guéris, cependant selon l’avancée des
cancers les traitements sont plus ou moins efficaces.
On distingue plusieurs types de cancers colorectaux. Dans plus de 80 % des cas, il s’agit de
cancers sporadiques, résultant de multiples mutations somatiques au sein de la cellule telles
que des délétions homozygotes, des mutations ponctuelles ou des insertions, des
translocations dans l’ADN 5, 6 . Il existe également des formes héréditaires, telles que le
cancer du côlon non polyposique (HNPCC, 10‐15%), la polypose adénomateuse familiale
(FAP, 10%) et le cancer sans polypose (10%) 7 .
11

Grâce à un dépistage plus précoce et aux progrès des traitements, en France, le taux de
survie à 5 ans est de 57,9%, l’un des meilleurs d’Europe 8 . Les sujets à risque moyen de
cancer colorectal sont les individus de plus de 50 ans. L’incidence du cancer croit avec l’âge;
elle est faible avant 30 ans, elle augmente significativement entre 40 et 45 ans, puis double
tous les 10 ans et est maximale vers 70 ans. En effet, environ 70% des patients ont plus de
65 ans et le cancer du côlon est plutôt rare chez des patients ayant moins de 45 ans (2 pour
100 000 par an). Dans le groupe des patients âgés de 45 à 54 ans, l’incidence est d’environ
de 20 pour 100 000 par an et par la suite, augmente à un taux beaucoup plus élevé : 55 pour
100 000 par an pour les 55 à 64 ans, 150 pour les 65 à 74 ans et supérieur à 250 pour 100
000 par an pour les plus de 75 ans 9 .
En général, la médiane de survie des patients atteints d’un cancer du côlon avancé est
d’environ 5 à 6 mois. En revanche, plus de la moitié des patients présentent ou
présenteront des métastases, et recevront un traitement adjuvant, comme la
chimiothérapie (Folfox), la médiane de survie est alors d’environ 10 à 12 mois mais leur taux
de survie à 5 ans chute à 9% 2, 10 .
3. Transformation cellulaire/développement tumoral
Le cancer est une pathologie des organismes complexes présentant des tissus
renouvelables. Cette maladie complexe peut affecter tous les tissus. Elle se développe suite
à l’accumulation de plusieurs altérations de l’ADN 11 sous l’effet de facteurs divers
(génétiques héréditaires, chimiques, physiques, biologiques et alimentaires) qui provoquent
l’apparition et la progression de la tumeur. Actuellement, environ 384 gènes sont répertoriés
comme pouvant être impliqués dans un cancer humain 12 . Aux altérations diverses de ces
gènes (délétion, translocation…) peuvent s’ajouter, dans le processus de transformation
cellulaire, des modifications épigénétiques comme des méthylations de l’ADN… 13 .
Plus récemment, il a été mis en évidence dans des tumeurs l’existence de cellules possédant
des propriétés de cellules souches (ayant des capacités d’auto‐renouvellement et de
différenciation) qui sont dénommées : « cellules souches cancéreuses » ou « cancer stem
cells » (CSC). Elles seraient à l’origine de la grande variété des cellules différenciées
présentes au sein de la tumeur. Dès 1994, l’équipe de Dick mettait en évidence, au sein de
myélomes murin, l’existence des cellules initiatrices de cancers 14 . Mais c’est bien plus tard,
que ces CSC ont été mises en évidence dans des carcinomes de sein 15 et de tumeurs
12

cérébrales 16 chez des patients. Il semblerait que les tumeurs solides soient constituées de
proportions variables de CSC en fonction des patients 17 et que ces cellules initient le
développement tumoral 18 et maintiennent continuellement la tumorigenèse.
En 2000, D. Hanahan et R. Weinberg ont suggéré que les six principales
caractéristiques des cellules cancéreuses étaient les suivantes : autonomie de croissance,
insensibilité aux inhibiteurs physiologiques de la croissance cellulaire, échappement à
l’apoptose, capacité de se diviser de façon illimitée (immortalisation), forte capacité
angiogénique, d’invasion et de formation de métastases.
Récemment, vu l’importance du rôle de surveillance du système immunitaire dans le
développement des cellules tumorales, l’échappement à l’immunosurveillance a été suggéré
comme septième caractéristique fondamentale des cellules tumorales.
En effet, le développement d’une tumeur au sein d’un organisme est étroitement lié à son
système immunitaire. Il est aujourd’hui bien connu qu’il existe un système
d’immunosurveillance protégeant l’hôte de l’installation d’un foyer tumoral.
Cependant, ce système peut également faciliter dans certains cas la progression tumorale.
Le système immunitaire peut jouer un rôle ambivalent dans les relations entre l’hôte et la
tumeur.
4. Classification TNM (Tumeurs, Nodules, Métastases)
Le système de classification des tumeurs est basé sur la profondeur des tissus envahis
et le nombre de ganglions atteints. La classification TNM est le système international actuel
de référence, proposé par le chirurgien français Pierre Denoix dans les années 1940‐1950, de
façon à classer les cancers selon leur extension anatomique. Dans son principe, cette
classification considère seulement les données cliniques et ne s’applique qu’à des cancers
qui n’ont pas encore été traités.
La lettre T symbolise la tumeur initiale, et la profondeur des tissus envahis. Elle est affectée
de coefficient : de T0 (quand la lésion primitive n’est pas retrouvée) à T4 pour les tumeurs
les plus étendues. Cette cotation dépend du volume tumoral, représenté par le diamètre
maximum de la lésion, et de l’extension aux organes voisins (peau, vaisseaux, nerfs, os, etc.).
La lettre N, de N0 à N3, dépend du territoire ganglionnaire, plus ou moins proche de la
tumeur, de l’importance des adénopathies, du nombre de ganglions envahis. La lettre M est
13

cotée M0 en l’absence de métastases connues ou M1 en leur présence, quel que soit leur
siège, unique ou multiple.
A partir de cette observation, les cancers du côlon ont été classés en quatre stades :
‐ Stade I (T1‐T2, N0, M0)
‐ Stade II (T3‐T4, N0, M0)
‐ Stade III (Tous T, N1‐N2, M0)
‐ Stade IV (métastases à distance)
Ce système de classification topographique était prépondérant quand les principaux
traitements des cancers, la chirurgie et la radiothérapie, n’avaient que des effets localisés. Sa
pertinence diminue avec les traitements systémiques tels que la chimiothérapie,
l’hormonothérapie, l’immunothérapie, la thérapie géniques…L’intérêt croissant pour de
nouveaux caractères biologiques (degré de malignité, récepteurs hormonaux, modifications
des chromosomes ou d’oncogènes, signature génétique…) participant à l’élaboration de la
stratégie thérapeutique réduit encore davantage la pertinence de ce classement.
B. Traitements
1. Chirurgie
La chirurgie constitue le traitement de première intention du cancer du côlon. Les
cancers très superficiels sont parfois totalement réséqués par voie endoscopique, sans
chirurgie complémentaire si la muqueuse musculaire n’est pas franchie. La chirurgie permet
d'enlever la tumeur et les ganglions environnants. Toutefois, même dans le cas d’une
tumeur bien localisée et délimitée, le seul traitement par chirurgie reste souvent insuffisant.
En effet, les deux tiers des patients souffrant d’un cancer du côlon sont traités par la
chirurgie dans un but curatif. Malheureusement près de 50 % de ces patients développent
des métastases (dans le foie, les poumons…) après l’intervention. Cette seconde atteinte
survient dans 90% des cas durant les 5 années post opératoires 21 .
Il y a quelques années, la chirurgie curative était synonyme de chirurgie mutilante pour le
patient atteint d’une tumeur solide. Avec l’apparition de la chirurgie laparoscopique et de la
microchirurgie endoscopique trans‐anale cela n’est plus le cas 22, 23 . Cependant, ces progrès
ont certes permis de diminuer le nombre de récidives locales mais ne permettent pas de
traiter des cancers ayant déjà développé des métastases. C’est pourquoi dans bien des cas,
on y associe des traitements adjuvants tels que la chimiothérapie, s’il y a des métastases
14

ganglionnaires, hépatiques ou pulmonaires, ou l'application de traitements physiques sur les
métastases : radiothérapie (rare), ablation par radiofréquence (RFA), traitements thermiques
(cryothérapie) plus récemment découverts 24 .
2. Chimiothérapie
La chimiothérapie, quant à elle, est utilisée pour prévenir ou traiter les cancers
métastatiques. Cette thérapie consiste à administrer au malade un médicament cytotoxique
ciblant les cellules ayant une activité mitotique importante, comme les cellules tumorales,
mais malheureusement aussi les cellules normales intestinales et hématopoïétiques et celles
des follicules pileux.
Nous devons la paternité du concept de chimiothérapie à Paul Ehrlich qui proposa en 1909
un traitement de la syphilis, à partir d’un dérivé d’arsenic, le Salvarsan. Mais la recherche
active d’agents chimiothérapeutiques à visée antitumorale n’a débutée que dans les années
1950. Entre 1955 et 1975, le modèle L1210 de leucémie chez la souris a ainsi permis au NCI
(National Cancer Institute) de développer 21 molécules (anthracyclines, taxanes, platines…)
destinées à lutter contre le cancer et approuvées ultérieurement par la FDA (Food and Drug
Administration) pour une utilisation clinique chez l’homme 25 .
Les chimiothérapies classiques regroupent un ensemble de médicaments que l’on peut
classer en quatre catégories suivant leur mode d’action :
‐ Les agents alkylants (ex : dérivés du platine, tel que l’oxaliplatine)
‐ Les antimétaboliques (ex : 5‐Fluorouracile, Méthotrexate, Fludarabine)
‐ Les poisons du fuseau mitotique (ex : vinca‐alcaloides, taxanes (paclitaxel))
‐ Inhibiteurs des topo‐isomérases I (ex : camptothécines) et II (ex : anthracyclines)
Avant les années 1990, la principale molécule active contre les métastases des cancers
colorectaux était le 5‐Fluorouracile (5‐FU). Il est toujours la molécule de référence et entre
dans la quasi totalité des protocoles de chimiothérapie. En monothérapie, le taux de réponse
à un an atteint seulement 10 à 15% avec une faible survie des patients 26,27 . De plus, le 5‐FU
présente des effets toxiques importants (digestifs et hématologiques) qui peuvent être
limitants chez certains patients. Il était donc important de trouver d’autres molécules. Deux
nouvelles molécules ont alors fait leur apparition : l’irinotécan et l’oxaliplatine.
15

L’irinotécan (CPT‐11, Camptosar®) a été identifié dans les années 1980. Son activité comme
inhibiteur de la topoisomérase I semble particulièrement intéressante car elle diffère de
celle du 5‐FU. Dans un premier temps, son activité a été démontrée en seconde ligne
thérapeutique contre des tumeurs réfractaires au 5‐FU. D’autres études ont également
révélé son intérêt dans un traitement combiné CPT‐11 plus 5‐FU. Les toxicités dues à
l’irinotécan sont assez invalidantes, comme des diarrhées profuses et des neutropénies 28‐30 .
La seconde molécule d’intérêt dans le traitement des cancers colorectaux est l’oxaliplatine
(LOHP, Eloxatine®). L’oxaliplatine est un dérivé de platine de troisième génération,
synthétisé dans les années 1970. L'atome de platine est complexé avec un 1,2
diaminocyclohexane (DACH) et un groupe oxalate. C’est un énantiomère unique, le cis‐
[oxalato (trans 1‐1‐1,2‐DACH) platine].
L’oxaliplatine est la première molécule à base de platine, utilisée en monothérapie ou pluri‐
thérapie, ayant une activité clinique contre les cancers colorectaux. Elle possède une action
alkylante inhibant la synthèse et la réplication de l’ADN par formation de ponts intrabrins
entre deux guanines adjacentes. L’oxaliplatine forme des adduits de platine sur l’ADN, créant
des lésions et induisant l’apoptose de la cellule 26 . Des études lui confèrent une activité en
seconde ligne et en monothérapie contre les tumeurs réfractaires au 5‐FU. Mais son
principal intérêt réside dans la synergie développé avec le 5‐FU. Cette combinaison présente
une efficacité qui la place au rang des associations les plus actives dans cette pathologie,
mais là encore au prix d’une toxicité neurologique importante 31‐34 .
En France, l’oxaliplatine a obtenu l’autorisation de mise sur le marché (A.M.M.) en 1996
dans l’indication des cancers colorectaux métastatiques résistants au 5‐FU. Deux ans plus
tard, la combinaison oxaliplatine/5‐FU/Acide folinique (FOLFOX) était acceptée en première
ligne thérapeutique. Aux États‐Unis, le traitement en seconde ligne date de 2003, et
l’approbation de première ligne a été autorisée en janvier 2004 35 . En seulement 8 ans, ce
médicament est placé au rang des traitements de référence dans les cancers colorectaux.
Cependant, le Folfox reste un traitement assez nouveau et ses paramètres d’efficacité et de
tolérance ne sont pas tous établis. L’oxaliplatine a un profil d’activité différent de ses
prédécesseurs (cisplatine et carboplatine), d’une part par son activité antitumorale puisqu’il
est actif contre les tumeurs résistantes au cisplatine et d’autre part pour sa relative bonne
tolérance clinique avec une absence de toxicités rénale et auditive et une faible
hématotoxicité 36‐38 . En revanche des atteintes neurologiques souvent invalidantes sont
16

limitantes. Le risque d'alopécie est plus faible sous oxaliplatine que sous Irinotecan. Par
contre, on observe des neuropathies invalidantes sous oxaliplatine responsables de
dysesthésies (fourmillements) au niveau des doigts et des orteils.
3. L’immunothérapie
Plus récemment devant l’échec relatif des traitements classiques, de nouvelles
stratégies thérapeutiques ont été envisagées telles que les immunothérapies ayant pour
objectif d’induire une réponse immunitaire capable de provoquer le rejet des cellules
tumorales. Il s’agit par exemple, de l’utilisation d’anticorps monoclonaux chimériques ou
humanisés dirigés contre des protéines des voies de signalisation couramment dérégulées
dans les cancers. Notamment, le bevacizumab (Avastin®) dirigé contre le VEGF (Vascular
Endothelial Growth Factor) qui est utilisé dans le cancer du côlon métastatique. Ce
médicament bloque la néo‐vascularisation empêchant l’augmentation de l'apport sanguin à
la tumeur, donc son développement 39 . Le cetuximab (Erbitux®) est un autre anticorps
monoclonal qui bloque l'action du récepteur à l'EGF (Epidermal Growth Factor) des cellules
cancéreuses et améliore significativement le pronostic de certains cancers du côlon 40,41 . Ces
anticorps ont des effets secondaires moins importants que ceux des chimiothérapies
conventionnelles dont ils augmenteraient l’efficacité, même si le gain reste faible (quelques
mois) 42 et le coût très élevé.
17

II. Immunité et cancer
La paternité de l’immunologie est attribuée à Edward Jenner, qui à la fin du XVII e
siècle, découvre que l’inoculation de la variole de la vache (vaccine ou Cowpox) inoffensive
pour les humains les protège contre la variole. Mais en réalité les premières études cliniques
montrant l’efficacité de l’inoculation de la variole datent plutôt du début du XVII e siècle 43 .
Au XIX e siècle Louis Pasteur découvre à son tour les vaccins contre la rage et le choléra. Puis,
au début du XX e siècle, Paul Ehrlich suggère que la prolifération anormale des cellules
cancéreuses peut être contrôlée par notre système immunitaire, idée qui à l’époque fut
rejetée. Enfin, dans les années 1950, Franck M. Burnet et Lewis Thomas, introduisent le
concept d’immunosurveillance des tumeurs, reposant sur le fait que le système immunitaire
a la capacité de détecter les cellules tumorales et de les détruire. A cette époque, la théorie
qui domine est celle de la reconnaissance du « soi » et du « non‐soi » par le système
immunitaire adaptatif. Cependant, elle ne permet pas d’expliquer les phénomènes de
tolérance et de rejet de greffe par exemple, ou la nécessité de la présentation de l’antigène.
C’est alors qu’à la fin des années 1980, Charles Janeway propose le concept d’immunité
innée. La décision de réagir ou non à un agent étranger reposerait sur la reconnaissance de
l’origine étrangère de motifs par des récepteurs, les PRR (Pattern Recognition Receptor).
Puis, Polly Matzinger dans les années 1990, développe la théorie du danger. D’après elle, le
déclenchement de la réponse immunitaire serait la conséquence de la reconnaissance de
motifs moléculaires associés aux organismes pathogènes (PAMP, Pathogen‐Associated
Molecular Pattern) par les PRR. Puis, dans les années 1990, Charles Janeway propose une
théorie suggérant une liaison étroite entre les deux types de réponse innée et adaptative :
les mécanismes moléculaires mis en jeu lors de la reconnaissance des micro‐organismes
contrôleraient la nature de la réponse adaptative 44 .
Enfin, dans les années 2000, différentes équipes suggèrent que le système immunitaire
serait activé, non pas par la reconnaissance du non‐soi, qu’il attaque par opposition au soi
qu’il tolère, mais plutôt par la reconnaissance par les PRR d’un soi endommagé, c'est‐à‐dire
de molécules signalant un danger ou une lésion et regroupées sous le nom de DAMP
(Danger Associated Molecular Pattern) 45, 46,47,48 . Ces molécules sont libérées lors d’une
exposition à un pathogène ou à une toxine, au cours de la mort cellulaire, d’un choc
18

hémorragique ou de l’ischémie : high‐mobility group box 1 (HMGB1), HSP (protéine du choc
thermique), ADN et ARN. D’autres ligands peuvent être libérés suite à une lésion tissulaire
chimique ou physique : fragments de hyaluronate, héparine sulfate, fibronectine et
fibrinogène.
A. Immunité innée
1. Généralités sur le système immunitaire inné
L’immunité innée est une réponse immédiate qui survient en l’absence
d’immunisation préalable, elle constitue la première barrière de défense vis‐à‐vis des agents
pathogènes et assure un rôle de sentinelle vis‐à‐vis des tumeurs. Elle fait intervenir des
barrières physiques (épithéliums digestifs, bronchique et uro‐génital), une composante
cellulaire (neutrophiles, macrophages…) et une composante humorale (facteurs du
complément…). La réponse immunitaire innée élimine les substances étrangères, les cellules
tumorales et leurs débris en les tuant et les phagocytant. Les cellules présentatrices
d’antigènes (CPA) activent le système immunitaire adaptatif de façon spécifique en lui
présentant des antigènes et en le stimulant.
2. Les récepteurs du système immunitaire inné
Les cellules immunitaires naturelles reconnaissent les cellules tumorales par
l'intermédiaire de récepteurs tels que NKG2D qui lie spécifiquement les protéines MICA,
MICB ou ULBP chez l'homme, H‐60 ou RAE chez la souris. L'interaction du récepteur NKG2D
avec son ligand induit l'activité cytotoxique des cellules NK et des macrophages. Les cellules
normales, qui à la suite d'un stress exprimeraient les ligands de NKG2D, sont protégées de
l'activité cytotoxique des cellules NK par les molécules d'histocompatibilité de classes I qui
en se liant à des récepteurs, tels que KIR (Killer cell Ig‐like Receptor), inhibent la signalisation
de NKG2D.
Les antigènes solubles, débris cellulaires ou les corps apoptotiques qui résultent de la mort
des cellules tumorales vont être reconnus et ingérés par les CPA par macro‐pinocytose, endo
ou phagocytose. La macro‐pinocytose ne nécessite pas de récepteur, elle est spontanée et
assure l'ingestion d'une grande partie des protéines. Les récepteurs qui induisent
l'endocytose sont principalement ceux des fragments Fc des immunoglobulines et des
fragments activés du complément qui opsonisent les antigènes ou les pathogènes, les
19

écepteurs de type lectines C (CLR) et les récepteurs scavenger. L'endocytose et la
phagocytose nécessitent une activation des CPA, et notamment les DC immatures. La
présentation de l'antigène n'est efficace que si des DC sont activés ce qui nécessite un
deuxième signal provenant du pathogène ou de la cellule anormale. Ce signal est reconnu
par un autre type de récepteur, les PRRs. Ces récepteurs ont été classés en trois
familles constituées par : les récepteurs d’endocytoses (les récepteurs d’épuration ou
« scavenger receptor » et les récepteurs lectiniques de type‐C), les récepteurs de
signalisation (les molécules « Toll‐like receptors » (TLR) et les récepteurs intracellulaires hors
TLRs comme les « NOD‐like receptor ») et les récepteurs solubles (les collectines, les ficolines
et les pentraxines) 49 . Ces récepteurs sont exprimés constitutivement par les CPA et
reconnaissent des courts motifs communs à des familles de molécules bactériennes, virales,
parasitaires ou fongiques appelés PAMP, mais aussi les DAMP, molécules du soi qui
proviennent des cellules mortes, mourantes ou souffrantes. Plusieurs études ont montré
que ces signaux pouvaient induire l’activation et la maturation des cellules dendritiques
52 .
La liaison de ces signaux « dangers » avec un PRR va aboutir à l’activation de l’immunité
innée. Cette activation peut se traduire par la sécrétion de cytokines inflammatoires (IL‐1β,
TNF‐α, IL‐6…), la migration cellulaire (avec l’acquisition de CCR7 par exemple), l’expression
de molécules de stimulation (CD80, CD86,…) permettant aux cellules de l’immunité innée
d’acquérir la capacité de présenter l’antigène 53, 54 .
Ces dernières années, les TLR qui font partie des PRR ont fait l’objet de nombreuses études.
Treize TLR ont pour l’instant été identifiés chez les mammifères dont dix chez l’homme.
Les TLR présentent une structure particulière très conservée. Il s’agit de glycoprotéines de
type I intégrées à la membrane avec un domaine extracellulaire LRR (Leucine‐Rich Repeats)
et un domaine cytoplasmique TIR (Toll IL‐1 Receptor). Le domaine extracellulaire interagit
avec les structures microbiennes et induit l’oligomérisation des récepteurs. Les domaines
TIR, quant à eux participent au recrutement de molécules adaptatrices qui initient la
signalisation. Les TLR‐1,‐2,‐4,‐5,‐6 sont localisés au niveau de la membrane plasmique, les
TLR‐3,‐7,‐8,‐9, de la membrane endosomale.
L'activation des TLR conduit à celle de NFkB et d'IRF‐3 et à la production de cytokines
inflammatoires et d'IFN, de chimiokines, à l'expression de CD40 et des molécules de co‐
stimulation CD80 et CD86.
50, 51,
20

3. Les cellules du système immunitaire inné
Les cellules de l’immunité innée n’ont pas seulement la responsabilité de surveiller et
d’informer l’hôte mais ont également des fonctions antitumorales dont la lyse des cellules
tumorales et la production de cytokines inhibant la croissance tumorale et bloquant
l’angiogenèse. Les cellules du système immunitaire inné sont les mastocytes, les
polynucléaires, les macrophages, les cellules myélosuppressives, les cellules NK et les cellules
dendritiques. D’autres cellules participent à la croissance tumorale ou à son contrôle, ce sont
celles du stroma : les fibroblastes et les cellules endothéliales principalement. Les récepteurs
de ces cellules mais aussi les facteurs qu’elles produisent y participent également. Il s’agit
des cytokines, des chimiokines, de la protéine C‐réactive, des protéines de la cascade du
système du complément, et des facteurs du micro‐environnement ne provenant pas de la
tumeur tels que l’arginine, des lipides 56, 57, 58, 59 .
a) Les neutrophiles
Le neutrophile, ou leucocyte polymorphonucléaire (PMN), a été décrit pour la
première fois par Paul Ehrlich dans les années 1900. Le diamètre de ces cellules est de 10 à
20µm et il est caractérisé par un noyau polylobé et de nombreux granules cytoplasmiques.
Comme les autres cellules du système immunitaire, le neutrophile se différencie dans la
moelle osseuse à partir d’une cellule souche hématopoïétique. Les neutrophiles en
circulation et en périphérie ont une durée de vie courte de 7 à 12 heures. Ils sont attirés par
des chimiokines, dont celles qui pourraient être produites dans la tumeur par les cellules
endothéliales, les fibroblastes voire les cellules tumorales.
La migration des neutrophiles des vaisseaux sanguins vers les tissus est contrôlée par une
cascade d’interactions. En condition normale, les neutrophiles s’attachent faiblement aux
cellules endothéliales qui forment la paroi interne du vaisseau sanguin. Ceci est dû à des
molécules d’adhésion de faible affinité, les sélectines et les « mucine‐like », exprimées à la
surface des cellules endothéliales et des neutrophiles (par exemple, respectivement, la P‐
sélectine et le P‐sélectine ligand (PSGL‐1). Emportés par le flux sanguin, ils roulent
littéralement sur la paroi du vaisseau: il s’agit de l’étape de roulement ou «rolling» 60, 61, 62 .
Si, durant cette première étape, les neutrophiles sont en contact avec des produits
bactériens (ex: peptides formylés (fMLP), lipopolysaccharides (LPS)), d’autre molécules
21

proinflammatoire et chimiokines (leucotriène (LT) B4, IL‐8, fragments du complément), les
neutrophiles entrent alors dans la deuxième étape: l’activation 60,62 . Les neutrophiles activés
et les cellules endothéliales en condition inflammatoire vont alors exprimer de nouvelles
molécules à leur surface: des molécules d’adhérences de forte affinité telles que les
intégrines chez les neutrophiles et les molécules de la superfamille des immunoglobulines
sur l'endothélium. Il peut à ce moment y avoir interaction entre LFA‐1 (Leucocyte Function
associated Antigen) et son ligand ICAM‐1 (InterCellular Adhesion Molecule), mais également
entre des sélectines ou ICAM1 et l’intégrine LFA‐1 (CD11a / CD18 ou l'intégrine L2 / CD18)
et ICAM1 et MAC1 (CD11b / CD18 ou l'intégrine M2 / CD18).
Les neutrophiles vont alors se fixer fermement à la paroi du vaisseau sanguin: c’est la
troisième étape d’arrêt et d’adhérence ferme. Enfin la quatrième étape est l'immobilisation
des neutrophiles qui provoque une réaction inflammatoire, qui conduit à leur diapédèse ou
extravasation et à l'infiltration des tumeurs 60,62 . Les neutrophiles sont donc activés par
paliers : ils sont élicités des vaisseaux sanguins, primés puis activés par le chimiotactisme, la
transmigration et le microenvironnement tumoral.
Une tumeur est le siège d'une réaction inflammatoire plus ou moins forte mais permanente
qui conduit à son infiltration plus ou moins importante par des neutrophiles. Mais, le rôle
des neutrophiles sur la croissance tumorale est sujet à discussion. En effet, un certain
nombre de travaux suggèrent un rôle plutôt pro‐tumoral des neutrophiles. Récemment, il a
été montré que la déplétion des neutrophiles provoque un retard de croissance de la
tumeur, notamment en diminuant la quantité de VEGF et de MMP‐9 dans le
microenvironnement tumoral et en réduisant l’angiogenèse 63, 64 . Par contre, d'autres
travaux montrent que la déplétion en neutrophiles (au moyen d’anticorps monoclonaux) et
l’inhibition de leur recrutement a pour conséquence premièrement d’augmenter la vitesse
de croissance des tumeurs 65, 66 , deuxièmement d'augmenter la quantité de cytokines de
type Th2 pro‐tumorales (IL‐4 et IL‐10) et enfin de diminuer la quantité de cytokines de type
Th1 antitumorales (IFN‐γ et IL‐12) 67 . Ces données montrent qu'il n'existe pas de loi générale
régissant le devenir d'une tumeur infiltrée par des neutrophiles mais des situations
individuelles dont l'issue ne dépend pas des seuls neutrophiles mais des autres cellules de la
tumeur et du microenvironnement.
Néanmoins, en situation inflammatoire le comportement du neutrophile est constant. Leur
survie est augmentée, jusqu’à 4 jours 68, 69 . Grâce à leur capacité importante de réponse au
22

chimiotactisme, les neutrophiles sont attirés en très grand nombre sur le site de
l’inflammation où ils sont pleinement activés par des facteurs inflammatoires (GM‐CSF, IL‐8,
GROα, β et γ, IFN‐γ, IL‐4, TNF‐α …). Les neutrophiles ainsi activés deviennent cytotoxiques,
grâce à la production des ROS (Reactive Oxygen Species), et des effecteurs de mort, toxiques
pour toutes les cellules qui n'en sont pas protégées 70 . Le neutrophile lui‐même se protège
de certains facteurs toxiques qu'il produit en les confinant dans des granules 70, 71 . Ces
granules sont classés en quatre catégories :
‐ les granules primaires : les azurophiles. Rarement sécrétés à l'extérieur de la cellule,
fusionnant plutôt avec le phagosome pour y délivrer des enzymes dégradant les débris
cellulaires.
‐ les granules secondaires : ou spécifiques sont riches en lactoférine et métallo‐
protéase inactives, elles sont alors libérées dans le milieu extracellulaire où elles sont
activées.
‐ Les granules tertiaires : ou granules de gélatinases contiennent, comme leur nom
l’indique, des gélatinases.
‐ les granules sécrétés : contiennent des phosphatases alcalines.
Les neutrophiles expriment également à leur surface les récepteurs des fragments Fc des
immunoglobulines (FcγRI et FcγRII), qui leur permettent de s’attaquer aux tumeurs par ADCC
(antibody dependent cellular cytotoxicity). En général, les neutrophiles cherchent à détruire
les pathogènes en les ingérant dans des phagolysosomes et en les soumettant à des
molécules toxiques, des enzymes, des espèces réactionnels de l’oxygène, des anions
superoxydes et du monoxyde d’azote. Les neutrophiles peuvent également sécréter des
molécules toxiques comme les défensines et les enzymes lysosomiales. Si les neutrophiles
n’arrivent pas à ingérer les pathogènes, ils libèrent alors ces médiateurs dans
l’environnement extracellulaire et contribuent ainsi aux dommages cellulaires locaux 72 . La
production de ces facteurs très labiles se fait donc à proximité de la cellule tumorale. Par
contre les effecteurs de mort comme FasL se fixent sur leur récepteur Fas, soit après avoir
été produits dans le milieu extracellulaire soit ancrés à la membrane cellulaire du
neutrophile 73, 74, 75, 76 .
23

) Les macrophages
Les macrophages, obtenus à partir de la différenciation des monocytes circulants,
sont des phagocytes mononuclées présents dans un grand nombre de tissus. Leurs
principales fonctions dans le système immunitaire sont de réguler la réaction inflammatoire
locale par production de cytokines pro‐ ou anti‐inflammatoires, de fournir un premier
mécanisme de défense non spécifique par phagocytose et d’initier le déclenchement d’une
réponse immunitaire adaptative par présentation d’antigènes aux lymphocytes T 77 . Leur
activation dépend de leur état de différenciation, ainsi que de facteurs extérieurs : cytokines
et stimuli inflammatoires ou anti‐inflammatoires. Les macrophages présents in situ peuvent
être activés par différentes cytokines dont l’IFN‐γ, L’IL‐4, le TNF‐α ou encore le Granulocytes
and Macrophages Colony Stimulating Factor (GM‐CSF). Les macrophages disposent de
récepteurs NKG2D qui reconnaissent à la surface des cellules tumorales des ligands MIC A,
MIC B ou ULBP (chez l'homme), H‐60 ou RAE (chez la souris) 78, 79 . Leur interaction active la
cytotoxicité des macrophages qui se traduit par la sécrétion de cytokines cytotoxiques (TNF‐
, IL‐1β, IL‐6…) la production de radicaux libres dont le NO et la sécrétion de protéases
(lysozymes, urokinase, collagènase, élastase…). Les macrophages disposent également de
récepteurs des fragments Fc des immunoglobulines et des fragments activés du complément
qui après liaison avec des antigènes induisent la phagocytose des débris cellulaires et des
cellules tumorales entières 80 .
Les macrophages apprêtent les antigènes tumoraux et sont capables de présenter le même
peptide fixé soit à une molécule du CMH I soit à une molécule du CMH II, ce qui permet le
développement d'une réponse T, ce qui fait des macrophages des CPA. De plus, les
macrophages sont sensibles à l’environnement et adaptent leur activité en réponse aux
différents signaux provenant de la tumeur. En effet, les cytokines de type Th1, telles que
l’IFN‐, l’IL‐1 induisent de la part des macrophages des réponses anti‐tumorales :
cytotoxicité (production de TNF‐, FasL), stimulation de la réponse adaptative (production
d'IL‐12, IL‐23), inhibition de l'angiogénèse (production de MMP‐12), le macrophage est alors
dit de phénotype M1. En revanche, des cytokines Th2 comme l’IL‐4 et l’IL‐13 induisent des
réponses pro‐tumorales : facteurs de croissance (ornithine, polyamines) inhibition de la
réponse adaptative (TGF‐1, IL‐1Ra), angiogénèse (VEGF…) et un phénotype de type plutôt
M2 81, 82, 83, 84, 85, 86 .
24

c) Les cellules Natural Killer
Il s’agit de grands lymphocytes granuleux capables de lyser spontanément certaines
cellules tumorales sans stimulation antigénique préalable. La fonction des cellules NK est de
reconnaître et de tuer des cellules tumorales ou infectées par des virus en induisant
l’apoptose.
Les cellules NK reconnaissent des ligands chez l’homme comme les protéines MIC A, MIC B,
codées dans le locus HLA, ULBP (UL‐16 binding proteins) ou chez la souris les protéines RAE,
H‐60 à la surface des cellules tumorales, par l'intermédiaire de récepteurs NKG2D qui
transmettent un signal activateur 87 . La particularité de ces différents ligands est d'être
induits dans des circonstances de stress cellulaire ou de transformation tumorale.
Les NK reconnaissant également les molécules du CMH I grâce aux récepteurs KIR qui
inhibent l’action des récepteurs NKG2D 88, 89 , ce qui a pour conséquence de bloquer l'activité
toxique des cellules NK pour les cellules qui expriment le CMH I, c'est‐à‐dire les cellules
normales et certaines cellules tumorales, et une activité toxique des cellules NK pour les
cellules tumorales qui n'expriment pas le CMH I 90, 91, 80 88,89 . L’activation des cellules NK
résulte également d'interactions entre des molécules d'adhérence et leurs ligands, des
cytokines (IL‐2, IFN‐γ, TNF‐…) et leurs récepteurs.
L'activation des cellules NK se fait au niveau de synapses immunologiques, les liaisons
formées activent la production et la sécrétion de granzymes et de perforines dans l'espace
synaptique, de cytokines cytotoxiques (TNF‐, FasL, TRAIL), de cytokines cytotoxiques et
régulatrices (IFN‐), et l'apoptose des cellules tumorales 88, 89, 92, 93 . L'IL‐2 induit la
prolifération et la différenciation de cellules NK cytotoxiques, les Lymphokine Activated Killer
cells qui peuvent être obtenus in vitro et transférées aux patients.
d) Les cellules myéloïdes suppressives
Les cellules myéloïdes suppressives (MDSC pour myeloid‐derived suppressor cells)
sont identifiées chez l’homme et chez la souris comme des cellules immatures capables
d’inhiber les fonctions des lymphocytes T. Elles s’accumulent au cours de la croissance
tumorale chez la souris et chez l’homme et contribuent au développement des tumeurs.
Les MDSC représentent une population hétérogène de la lignée myéloïde de type
monocytes/macrophages à des stades variés de différenciation et sont caractérisés par une
forte capacité à supprimer les différentes fonctions des cellules T. Chez la souris, les MDSC
25

ont été identifiées comme des cellules co‐exprimant les marqueurs membranaires CD11b et
Gr‐1 (Ly6C/G) 94 et une morphologie mixte associant des caractéristiques de monocytes
mononucléés et des polynucléaires neutrophiles 95 . Chez l’homme les MDSC ont été définies
comme des cellules exprimant un marqueur myéloïde commun CD33 et une morphologie de
monocyte ou de polynucléaire neutrophile 96, 94 . Chez les patients atteints de différents types
de cancers, la proportion de ces cellules augmente de façon importante dans le sang
périphérique.
Les MDSC ont démontré leur capacité à inhiber l’activation des lymphocytes T par différents
mécanismes 97 . Elles assimilent et séquestrent l’arginine et la cystéine, privant les
lymphocytes T de ces acides aminés essentiels à leur activation puisqu’ils ne peuvent les
produire eux‐mêmes. En effet, les MDSC utilisent notamment deux enzymes impliquées
dans le métabolisme de la L‐arginine 98, 99, 100 : la NO synthétase inductible (iNOS) qui
convertit la L‐arginine en monoxyde d’azote (NO) et L‐citrulline 101 , et l’arginase. Ces deux
enzymes ont pour effet d’induire l’apoptose des lymphocytes T et elles produisent
également des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et des peroxynitrites qui inhibent les
lymphocytes T CD8 en catalysant la nitrosylation des récepteurs a l’antigène 102 .
Les MDSC ont été également montrées comme agissant indirectement en secrétant du TGF‐
β (Transforming Growth Factor β) 103, 104 et de l’IL‐10, cytokines induisant les lymphocytes T
régulateurs eux‐memes exercant une fonction suppressive sur les autres lymphocytes T 105 ,
106 . Enfin, les MDSC participent a la vascularisation tumorale en produisant des facteurs
proangiogeniques comme le VEGF 107 .
e) Les cellules dendritiques
Dans les tissus périphériques, les cellules dendritiques (DCs) sont présentes dans un
état « immature » qui autorise la capture des antigènes par pinocytose, endocytose ou
phagocytose 108 . Une fois les antigènes capturés, les DCs les apprêtent et acquièrent la
capacité de migrer vers les organes lymphoïdes secondaires drainants. L'antigène est le
premier signal qui active les DC, mais pour stimuler les lymphocytes T, les DC doivent
achever leur différenciation ce qui est le fait d'un deuxième signal issu de l'environnement. Il
peut s'agir d'une molécule de stress provenant des cellules tumorales tuées par les cellules
de la réponse innée. Les HSP par exemple libérées par les cellules tumorales activent les DC
par l'intermédiaire des TLR4. Les DC « matures » sont caractérisées par une activité
26

phagocytaire faible, la capacité de présenter l'antigène et celle de stimuler les lymphocytes T
69 . Les DCs présentent un large éventail de molécules de co‐stimulation et d’adhésion
(comme B7‐1, B7‐2, CD40, LFA3 ICAM1, ICAM3) qui, avec le récepteur de l'antigène lié à
l'antigène, participent à l'activation des lymphocytes T 109 . Pour que les lymphocytes T
prolifèrent et se diférencient en T auxilliaires de type 1 (Th1) et en T cytotoxiques un
troisième signal est nécessaire, il est fourni par les cytokines : IL‐2, IFN‐, IL‐12 produites
essentiellement par les cellules de la réponse innée.
III. Lipides A et immunothérapie
L’immunothérapie antitumorale est une stratégie permettant d’activer et d’améliorer
le fonctionnement du système immunitaire afin d’éliminer une tumeur sans affecter les
cellules normales. Elle regroupe des stratégies thérapeutiques très différentes selon qu’elles
mobilisent les ressources du système immunitaire du malade (immunothérapie active) ou au
contraire qu’elles utilisent des réactifs immunologiques ou des cellules immunitaires
apportés de l’extérieur (immunothérapie passive).
A. Immunothérapie non spécifique
L’immunothérapie active est non spécifique lorsqu’elle repose sur l’administration
d’activateurs du système immunitaire comme des agents bactériens ou des cytokines.
Un siècle après le concept initial de Paul Ehrlich et William Coley en 1890 110 , HW Herr a
utilisé le bacille de Calmette et Guérin (BCG) pour infecter des patients atteints de cancer de
la vessie 111 . Bien que le mécanisme précis de l’action de ce bacille ne soit pas connu, il est
probablement en rapport avec l’inflammation vésicale qu’il provoque qui conduit au rejet
des cellules cancéreuses de la paroi vésicale 112 . Aujourd’hui, le traitement standard des
tumeurs superficielles de la vessie est toujours la résection endoscopique suivie de
l’administration de BCG 113 .
Les cytokines qui sont libérées par différentes cellules en réponse à un signal d’activation 114 ,
peuvent être utilisées en immunothérapie pour leur action toxique sur les cellules
tumorales, ou stimulatrice sur la réponse immunitaire déficiente du patient, ou encore pour
améliorer la présentation d’antigènes tumoraux 115 . L’IL‐2 et l’IFN‐α sont les deux principales
cytokines utilisées dans cette approche. L’IFN‐α est utilisé surtout dans les cancers du rein
27

métastatiques 116 , les mélanomes malins 117 et les sarcomes de kaposi asymptomatiques
évolutifs 118 . L’IL‐2 est administrée à des patients atteints de mélanomes 119 et de cancers du
rein métastatiques 120 . L’association des deux cytokines, IL‐2 et IFN‐α, est plus efficace sur les
cancers du rein métastatiques que les cytokines seules 121 . De plus l’activité antitumorale de
l’IL‐12 a été démontrée dans de nombreuses études in vivo dans des modèles murins 122 , elle
a fait l’objet d’une dizaine d’essais cliniques de phase I dans différents types de cancers qui
laissent espérer des réponses encourageantes 123 .
B. Immunothérapie par des lipides A
1. Historique
Vers la fin des années 1870, Robert Koch propose la théorie que chaque maladie
infectieuse est provoquée par un micro‐organisme, puis on découvre que les bactéries
exercent souvent leur pouvoir pathogène en produisant des toxines. Cette activité toxique
étant liée au corps bactérien, elle fut dénommée endotoxine, par opposition aux exotoxines
diphtériques, tétaniques et botuliniques connues à l’époque et présentes dans le surnageant
de culture de bactéries 124 .
L'effet thérapeutique des toxines bactériennes contre les cancers a été observé dès le XIX ème
siècle. Un mélange de toxines provenant de Serratia marcescens (Bacillus prodigiousus,
Gram ‐) et de Erysipelas (Gram +) connu maintenant sous le nom de Streptococcus, filtré et
inactivé par la chaleur, a été utilisé pour traiter des patients atteints de carcinomes et de
sarcomes 125 par William Coley. Walter Morgan et Walther Goebel, dans les années 1930‐
1940, montrèrent que la toxine thermostable de toutes les bactéries Gram négatif contient
des polysaccharides, des lipides et des protéines. Puis Murray Shear en 1943, découvre que
la substance toxique antitumorale dans les toxines de Coley est essentiellement composée
de polysaccharides et de lipides, il la nomme lipopolysaccharide (LPS) 126 . La caractérisation
de la structure des LPS a permis l'identification du lipide A 127 et sa synthèse chimique 128 .
Les endotoxines sont des LPS qui participent à la constitution des parois de bactéries
Gram négatives, elles sont ancrées dans la région hydrophobique de la membrane externe
129 .
Les LPS sont composés de trois régions structurellement et génétiquement distinctes:
28

‐ La chaîne O‐spécifique est constituée de séquences oligosaccharidiques
répétées, responsables de l’activité antigénique. Cette partie permet le sérotypage des
bactéries 130 . Elle forme la partie externe du LPS.
‐ Le noyau oligosaccharidique ou « core » (ou KDO) constitue le lien entre la
chaine O spécifique et le lipide A. Cette région et le lipide A jouent un rôle fondamental dans
la croissance et la survie des bactéries.
‐ Le lipide A ancre la molécule de LPS à la membrane des bactéries, il est le siège
de l’activité inflammatoire des LPS. Le lipide A s’insère entre les phospholipides de la couche
externe de la membrane bactérienne. Le lipide A est moins variable que la chaine O, il est
commun à une espèce bactérienne.
Les Lipides A :
La plupart des lipides A sont toxiques. Le lipide A induit à lui seul l'expression de la
majorité des effets physiopathologiques de la molécule de LPS complète 132 . L’intégrité de la
structure du lipide A est nécessaire à son activité toxique. Il active les cellules du système
immunitaire (monocytes, macrophages, les polynucléaires, les lymphocytes B) et les cellules
endothéliales, qui expriment constitutivement les récepteurs TLR 133 .
Les premières expériences effectuées afin d’élucider la composition de la fraction
responsable de l’effet endotoxinique ont été faites dans les années 1950 par O. Lüderitz et
O. Westphal qui ont soumis les lipopolysaccharides à un traitement acide qui coupe le lien
covalent lipide A‐core. Ils ont ainsi obtenu le premier fragment de LPS qui ne contient plus
de polysaccharides provenant de l’antigène O ou du core. Ce fragment a été dénommé plus
tard lipide A. A la fin des années 1960, plusieurs équipes démontrèrent que les structures qui
ne comportent que le lipide A et le KDO sont aussi toxiques que les structures complètes, et
que la plus grande partie du core ne joue aucun rôle dans la toxicité. Le rôle du lipide A fut
définitivement établi en 1984, quand Tetsuo Shiba et Soichi Kusumoto synthétisèrent la
première molécule de lipide A d’Escherichia coli. Cette molécule synthétique présentait les
mêmes propriétés biologiques que le lipide A naturel, injectée à des animaux, elle stimulait
le système immunitaire 134, 135 . Le lipide A synthétique et sa version naturelle ayant la même
structure et la même activité biologique, il est établi que le lipide A est bien la structure du
LPS responsable de son effet biologique (à l’exception de son antigénicité) et de son effet
antitumoral 136 .
29

Le lipide A utilisé dans notre étude est L’OM‐174, un analogue de lipide A chimiquement
défini, hautement purifié à partir d’une souche mutante d’Escherichia coli produite par les
laboratoires OM Pharma (Meyrin, Suisse). Ce lipide A est une di‐glucosamine comportant 3
chaînes d’acides gras (2 acides hydroxymyristiques fixés chacun sur un groupement amine et
un acide laurique) et deux groupements phosphates 137 .
2. Voie de signalisation des lipides A
a) Récepteurs et protéines de la voie de signalisation
Les récepteurs Toll‐Like sont uniques dans leur capacité à reconnaître les PAMPs des
divers produits microbiens, incluant les lipides A. Il a été montré que les lipides A activaient
les cellules via le récepteur TLR4, probablement via également le récepteur TLR2 et par
l’intermédiaire de complexes formés avec les protéines LBP, CD14 et MD‐2.
LBP et CD14 :
La LBP pour « LPS binding protein » a été la première molécule découverte associée
au lipide A, il s’agit d’une protéine de transport de lipides.
La protéine CD14 est ancrée à la membrane par un glycosylphosphatidylinositol (GPI), elle
est préférentiellement exprimée à la surface des cellules myéloïdes matures (cellules
phagocytaires par exemple) 138 . Elle initie la transduction du signal du lipide A. Le CD14 fixé à
la membrane peut lier le lipide A en absence de LBP, cependant la LBP augmente son
affinité. Ce récepteur CD14 existe également sous forme soluble et peut se fixer sur des
cellules qui en sont déficientes, comme les cellules endothéliales.
La fixation du lipide A sur CD14 induit la translocation nucléaire de NF‐B et la libération du
facteur de transcription c‐Rel codant des cytokines pro‐inflammatoires comme l'IL‐6 139 . De
plus, cette fixation induit aussi l'expression de la NOS II (NO‐synthase inductible) et de l'IL‐1
des macrophages péritonéaux, alvéolaires et des monocytes du sang périphérique chez le rat
140 .
Enfin, l’importance de CD14 dans la réponse au lipide A a été démontrée dans des souris
déficiente en CD14, montrant une diminution de la réponse au lipide A 141 . De plus,
l’utilisation d'anticorps dirigés contre le CD14 inhibe la capacité des lipides A à stimuler les
30

cellules phagocytaires (inhibition de la production de TNF‐) ainsi que les cellules
endothéliales 138, 142 .
CD14 n’a pas le domaine transmembranaire requis pour l’activation cellulaire. Le complexe
LPS‐LBP‐CD14 requiert donc un récepteur supplémentaire pour transduire le signal de la
membrane au cytoplasme. CD14 transfert le signal à d’autres protéines transmembranaires,
notamment à TLR4, et à un moindre degré TLR2.
TLR4
Les TLR sont codés par dix gènes chez l’homme et douze chez la souris 143, 144 . Chaque
TLR reconnaît des PAMPs variés 143, 145 , leur activation induit la production de cytokines
proinflammatoires (IL‐1, IL‐6, TNF‐), de chimiokines (CCL‐20, IL‐8, RANTES), de molécules
cytotoxiques (NO et défensine) et l’expression de molécules de co‐stimulation (CD86, CD80,
B7.1 et B7.2) 145, 146, 147 .
Les souris de souche C3H/HeJ sont connues depuis plus de 30 ans pour leur absence de
réponse aux LPS. Cette déficience a été corrélée à la présence d’une mutation au niveau
d’un gène nommé Lps 148 . Beaucoup plus tard, il a été mis en évidence que ce gène Lps
correspondait à la forme mutée du gène TLR4 149 . La génération de souris déficientes en
TLR4 a peu de temps après confirmé l’implication du TLR4 dans la reconnaissance des LPS
150 .
TLR4 reconnaît non seulement le lipide A mais aussi différents ligands comme par exemple le
taxol 151 , HSP 60 (Heat Shock Protein) 152 , HSP 70 153 ou le hyaluronane 154, 155 . Les LPS et le
lipide A sont des immuno‐stimulateurs, donc TLR4 peut être activé par de petites quantités
de lipide A.
Le récepteur TLR4 est requis, mais cependant n’est pas suffisant pour induire une réponse
vis à vis du lipide A.
MD‐2 :
L’association de la protéine MD‐2 au domaine extracellulaire du TLR4 est nécessaire à
une activation optimale du TLR4 155, 156 . MD‐2 se trouve principalement sous forme soluble,
mais un domaine intra‐membranaire a été identifié dans sa séquence. Même si une
interaction directe MD‐2/Lipide A a été décrite, la fonction de MD‐2 est mal connue. Le
lipide A est transféré au complexe TLR4/MD‐2 par CD14 et interagit avec les 3 composants
31

de ce complexe. MD‐2 semble également interagir dans la reconnaissance du lipide A
159 .
b) Voie de signalisation de TLR4
157, 158,
La voie de signalisation intracellulaire des TLR est proche de celle des récepteurs à
l'IL‐1. Tous les TLR contiennent un domaine TIR (toll IL‐1 receptor) intracellulaire, qui
transmet en aval des signaux en recrutant une ou plusieurs protéines adaptatrices contenant
un domaine TIR, comme la protéine MyD88 (myeloid differentiation primary response
protein 88), TIRAP (TIR domain containing adaptator protein), TRIF (TIR domain containing
adaptator protein inducing IFN‐), TRAM (TRIF related adaptator molecule) , les protéines de
la famille IRAK 143, 160 .
La signalisation des TLR suit deux voies : la voie MyD88‐dépendante et la voie MyD88‐
indépendante.
MyD88 recrute différentes protéines telles que IRAK‐1,‐4 (IL1R associated kinase), et TRAF6
(TNFR associated factor 6), activant la voie des MAP kinases (p38, JNK1/2 et ERK1/2), ce qui
conduit à la translocation du facteur de transcription NF‐B (p50/p65) dans le noyau, à
l’activation d’AP‐1 (c‐Fos/c‐Jun) 161, 146 et à la synthèse de différents composés :
‐ Des cytokines pro‐inflammatoires telles que TNF‐α, IL‐1, IL‐6
‐ Des cytokines anti‐inflammatoires comme l’IL‐10
‐ Des médiateurs lipidiques, métabolites de l’acide arachidonique tels que les
prostaglandines, thromboxanes, leucotriènes ou le platelet‐activating factor (PAF‐1).
La voie MyD88‐indépendante ou TRIF‐dépendante aboutit plus tardivement à l’expression
de cytokines pro‐inflammatoires et à l’expression d’IFN‐ en activant IRF‐3 162 . Cette
dernière voie de signalisation peut activer d’une manière tardive les voies de NF‐B et des
MAPK.
3. Lipides A et immunité antitumorale
a) Réponses immunitaires générales induites par le lipide A
Toutes les cellules exprimant TLR4 sont capables de répondre au lipide A : les
monocytes circulants 164 , les neutrophiles 165 mais aussi les cellules endothéliales 166 . Le
lipide A se fixe sur les PBMCs (peripheral blood mononuclear cell) qui sécrètent alors des
cytokines pro‐inflammatoires comme l’IL‐1β, l’IL ‐6, le TNF‐α 167, 168, 136, 169 l’IL‐8, le PAF. Ces
32

différentes cytokines vont activer la production des médiateurs de l’inflammation, comme
les prostaglandines 170 et les leukotriènes, mais également les cascades du complément et
de la coagulation.
De plus, il a été montré que des analogues de lipide A induisent la production de fortes
concentrations d’anions superoxydes (O2 ‐ ) et de peroxyde d’hydrogène (H2O2) par des
monocytes humains 171 et des granulocytes 172 . L’expression de la NOSII et la production de
monoxyde d'azote (NO), médiateur toxique notamment pour les cellules tumorales, est
également augmentée par le lipide A dans les monocytes humains, murins et de rats
175, 176 .
b) Effets du lipide A sur l’immunité antitumorale
173, 174,
Il a été montré qu’après injection du lipide A de P.gingivalis chez la souris, les NK ont
une activité cytotoxique in vitro augmentée 177 . De plus, un analogue du lipide A, le MPL
(MonoPhosphoryl Lipid A), induit la maturation des DCs dérivant de monocytes et la
production d’IL‐12 par ceux‐ci, ainsi que l’augmentation de l’expression de molécules de co‐
stimulation CD40, CD80, CD86 et du marqueur de maturation CD83 178 .
L'IL‐1β, principalement sécrétée par les macrophages, peut aussi être libérée par les cellules
dendritiques, les cellules endothéliales, les NK, et les lymphocytes lors du traitement par un
lipide A. Cette cytokine a un effet directement cytotoxique pour les cellules tumorales et son
efficacité en association avec l'IFN‐γ a été démontrée in vivo contre le mélanome B16 chez la
souris C57BL/6 179 .
4. Immunothérapie par des lipides A
Des essais cliniques de phase I ont été réalisés sur des patients atteints de cancer
avec des lipides A préparés à partir de S. typhimurium ou S.minnesota 180 : MPL, ou avec des
lipides A synthétiques comme SDZ MRL 953 181 et ONO‐4007 182 .
Dans ces études, le MPL a bien été toléré et les toxicités cliniques majeures ont été la fièvre,
les frissons et une certaine rigidité du corps qui apparaissent dans 50% des cas à la dose de
250 µg/m 2 sans toxicité rénal ou hépatique. Concernant le SDZ MRL 953, il a été injecté en
injection unique à des doses croissantes, il a été bien toléré et a induit une augmentation du
nombre de granulocytes associée à une augmentation de la concentration de G‐CSF et d’IL‐6
dans le sérum des patients, mais de façon surprenante les concentrations de TNF‐α, d’IL‐1β
33

ou d’IL‐8 n’ont pas variées. Dans l’essai clinique utilisant l’ONO‐4007, une augmentation
significative des concentrations de TNF et d’IL‐6 a été retrouvée dans le sérum de patients.
Malheureusement, dans tous ces essais cliniques, aucune activité antitumorale des
différents lipides A n’a été détectée chez les patients.
5. Immunothérapie par l’OM-174
L’activité antitumorale de l’OM‐174 a été étudiée dans un modèle de cancer colique.
Les cellules cancéreuses coliques PROb injectées à des rats BDIX induisent des
carcinomatoses péritonéales, qui en absence de traitement induisent la mort de tous les rats
après quelques semaines. Des injections intraveineuses répétées d’OM‐174, tous les deux ou
trois jours, guérissent 90 à 100 % des rats 183 . Les cellules tumorales meurent, au moins en
partie, par apoptose, les tumeurs régressent et les animaux sont immunisés 184 . Cet effet
antitumoral a été corrélé à l’expression de la NOS II (ARNm et protéine) et à la production de
NO dans les tumeurs, à la production de cytokines de l’inflammation (IL‐1β, TNF‐α et IFN‐γ),
ainsi qu’à l’inhibition de l’expression de TGF‐β1 dans les tumeurs 185 .
L’OM‐174 a également un effet antitumoral dans un modèle de cancer mammaire
chez la souris. Les cellules cancéreuses mammaires EMT‐6 injectées par voie i.v. à des souris
syngéniques BALB/c provoquent des nodules pulmonaires. Les souris non traitées meurent
de leurs tumeurs en quelques semaines, alors que des injections en intraveineuses d’OM‐
174 répétées tous les 5 jours, augmentent leur survie, diminuent le nombre et le volume des
nodules pulmonaires et les souris guéries de leurs tumeurs sont immunisées (résultats non
publiés). Ce traitement est efficace chez des souris BALB/c KO pour la NOS II, il ne dépend
donc pas de la NOS II des cellules de la souris. Par contre, il n’est plus efficace chez des souris
KO pour la NOS II traitées par de l’aminoguanidine (AG). Donc l’efficacité du traitement
dépend de la NOS II des cellules tumorales (résultats non publiés). Ces résultats sont
cohérents avec le fait que des clones de cellules EMT‐6 (dont le clone EMT‐6J) répondant
fortement à l’IL1 pour produire beaucoup de NO sont peu tumorigènes tandis que des
clones de cellules EMT‐6 (dont le clone EMT‐6H) répondant faiblement à l’IL1 et produisant
peu de NO, sont très tumorigènes. L’utilisation de ces clones, des souris KO pour la NOS II ou
sauvages et de l’AG nous a permis de montrer que la NOS II des cellules de la souris facilite la
croissance tumorale, alors que la NOS II des cellules tumorales s’oppose à la croissance
tumorale 186 .
34

Ces données ont été suffisamment convaincantes pour que des essais cliniques
soient envisagés avec l’OM‐174. Des essais de phase I et I/II ont eu lieu, afin de déterminer
sa toxicité et sa pharmacocinétique. Un premier essai explorait des doses croissantes d’OM‐
174 (600, 800, 1000 et 1600 µg/m 2 ) en une injection unique, un second essai explorait un
nombre d’injections croissant d’OM‐174 administré à différentes doses données. Les
résultats ont montré que l’OM‐174 pouvait être injecté à une dose de 1000 µg/m 2 , 15 fois de
suite à 2 ou 3 jours d’intervalle sans toxicité importante, mais avec une production de TNF et
d’IL‐6 chez certains patients.
Objectif du travail
Le laboratoire à développé un protocole utilisant l’OM‐174, dans un modèle de
carcinomatoses obtenues par injection intrapéritonéale de cellules cancéreuses (cellules
PROb) générant des tumeurs progressives chez le rat BD‐IX. Nous avons montré que ce lipide
A guérit 95 % des rats porteurs de carcinomatoses péritonéales macroscopiques (tumeurs
constituées de dizaines de nodules de 3 à 5 mm) quand le traitement commence à 14 jours
après l’injection des cellules cancéreuses, alors que les rats non traités meurent tous de
leurs tumeurs. Cet effet antitumoral a été corrélé à l’expression de la NO synthase inductible
(NOS II, ARNm et protéine), à la production de NO dans les tumeurs, à la production de
cytokines de l’inflammation (IL‐1β, TNF‐α et IFN‐γ), ainsi qu’à l’inhibition de l’expression de
TGF‐β dans les tumeurs 183, 184 .
Cependant, lorsque le traitement commence plus tard après l’injection des cellules
cancéreuses (J28) et s’adresse à des tumeurs de plus en plus volumineuses, l’efficacité de
l’OM‐174 décroît. L'association oxaliplatine (un agent chimiothérapeutique couramment
utilisé en combinaison avec le 5‐FU dans les traitements des cancers coliques avancés) plus
OM‐174 rétablie cette efficacité. En effet, chez des rats porteurs de carcinomatoses
péritonéales envahissant tout le péritoine (tumeurs de plusieurs centimètres de diamètre)
une injection à J21 par voie intrapéritonéale d’oxaliplatine suivie à partir de J28 d’injections
par voie intraveineuse d’OM‐174 guérit tous les animaux, alors que le traitement par
l’oxaliplatine seul ou le lipide A seul n'est pas efficace.
Mon projet à donc consisté à étudier les mécanismes de l’immunothérapie par l’OM‐174
seul ou en combinaison avec l’oxaliplatine dans ce modèle de cancer colique chez le rat.
35

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
1. INCa. La situation du cancer en France en 2007. (2007).
2. Jemal, A. et al. Cancer Statistics , 2009 BOTH SEXES FEMALE BOTH SEXES
ESTIMATED DEATHS. Health Policy 59, 225-249(2009).
3. Jemal, A. et al. Global cancer statistics. CA: A Cancer Journal for Clinicians 61, 69-
90(2011).
4. Labianca, R. et al. Colon cancer. Critical reviews in oncology/hematology 74, 106-
33(2010).
5. Fearon, E.R. & Vogelstein, B. A genetic model for colorectal tumorigenesis. Cell 61,
759-67(1990).
6. Laurent-Puig, P., Agostini, J. & Maley, K. [Colorectal oncogenesis]. Bulletin du cancer
97, 1311-21(2010).
7. Narayan, S. & Roy, D. Role of APC and DNA mismatch repair genes in the
development of colorectal cancers. Molecular Cancer 15, 1-15(2003).
8. Etude ECARE, INCa. (2009).
9. Parkin, D.M., Bray, F.I. & Devesa, S.S. Cancer burden in the year 2000. The global
picture. European journal of cancer (Oxford, England : 1990) 37 Suppl 8, S4-
66(2001).
10. Institut de veille sanitaire, Bulletin épidémiologique hebdomadaire. Institut de veille
sanitaire
11. Bishop, J.M. Molecular themes in oncogenesis. Cell 64, 235-48(1991).
12. Santarius, T. et al. A census of amplified and overexpressed human cancer genes.
Cancer 10, 59-64(2010).
13. Yoo, C.B. & Jones, P.A. Epigenetic therapy of cancer : past , present and future. 5, 37-
50(2006).
14. Lapidot, T. et al. A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation
into SCID mice. Nature 367, 645-8(1994).
15. Al-hajj, M. et al. Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells. Cell
(2003).
16. Singh, S.K. et al. Identification of human brain tumour initiating cells. Nature 432,
396-401(2004).
17. Quintana, E. et al. Efficient tumour formation by single human melanoma cells. Nature
456, (2008).
36

18. Kelly, P.N. et al. Tumor growth need not be driven by rare cancer stem cells. Science
(New York, N.Y.) 317, 337(2007).
19. El Hage, F. et al. [Immune response and cancer]. Bulletin du cancer 95, 57-67(2008).
20. UICC, Union for International Cancer Control.
21. Tjandra, J.J. & Chan, M.K.Y. Follow-up after curative resection of colorectal cancer: a
meta-analysis. Diseases of the colon and rectum 50, 1783-99(2007).
22. Kahnamoui, K. et al. Laparoscopic surgery for colon cancer: a systematic review.
Canadian journal of surgery. Journal canadien de chirurgie 50, 48-57(2007).
23. Bemelman, W.A. Minimally invasive surgery for early lower GI cancer. Best practice
& research. Clinical gastroenterology 19, 993-1005(2005).
24. Gillams, A.R. The use of radiofrequency in cancer. British Journal of Cancer 1825 -
1829(2005).doi:10.1038/sj.bjc.6602582
25. SKIPPER, H.E. & THOMSON, J.R. Effects of a series of tumor-inhibiting agents and
related compounds on L1210 leukemia and drug-resistant lines thereof. Cancer
research Suppl. 3, 44-6(1955).
26. Grivicich, I., Peters, G.J. & Schwartsmann, G. Irinotecan and oxaliplatin : an overview
of the novel chemotherapeutic options for the treatment of advanced colorectal cancer.
Brazilian Journal Of Medical And Biological Research (2001).
27. Shields, A.F. et al. Treatment of Advanced Colorectal Carcinoma with Oxaliplatin and
Capecitabine. Cancer 531-537(2003).doi:10.1002/cncr.11925
28. Tebbutt, N.C. et al. Systemic treatment of colorectal cancer. European Journal of
Cancer 38, 1000-1015(2002).
29. Coutinho, A.K. & Rocha Lima, C.M. Metastatic colorectal cancer: systemic treatment
in the new millennium. Cancer control : journal of the Moffitt Cancer Center 10, 224-
38
30. Bleiberg, H. & Bruxelles, L.D. Review CPT-11 in Gastrointestinal Cancer. Science 35,
(1999).
31. Extra, J.M. et al. Pharmacokinetics and safety profile of oxaliplatin. Seminars in
oncology 25, 13-22(1998).
32. Wiseman, L.R. et al. Oxaliplatin: a review of its use in the management of metastatic
colorectal cancer. Drugs & aging 14, 459-75(1999).
33. Gramont, A. de et al. Leucovorin and fluorouracil with or without oxaliplatin as firstline
treatment in advanced colorectal cancer. Journal of clinical oncology : official
journal of the American Society of Clinical Oncology 18, 2938-47(2000).
37

34. Raymond, E. et al. [Preclinical studies of oxaliplatin in combination chemotherapy].
Bulletin du cancer 88 Spec No, S26-34(2001).
35. André, T. et al. [Oxaliplatin in combination with 5-fluoro-uracil and folinic acid as
treatment of metastatic colorectal cancer]. Bulletin du cancer 88 Spec No, S20-
5(2001).
36. Cassidy, J. & Misset, J.-L. Oxaliplatin-related side effects: characteristics and
management. Seminars in oncology 29, 11-20(2002).
37. Gamelin, E. et al. Clinical aspects and molecular basis of oxaliplatin neurotoxicity:
current management and development of preventive measures. Seminars in oncology
29, 21-33(2002).
38. Grothey, A. Oxaliplatin-safety profile: neurotoxicity. Seminars in oncology 30, 5-
13(2003).
39. Ferrara, N. et al. DISCOVERY AND DEVELOPMENT. Discovery 3, 1-10(2004).
40. Chau, I. & Cunningham, D. Treatment in advanced colorectal cancer : what , when and
how ? WHAT IS AN APPROPRIATE PRIMARY END POINT IN. British Journal of
Cancer 100, 1704-1719(2009).
41. Nicolantonio, D. J OURNAL OF C LINICAL O NCOLOGY Wild-Type BRAF Is
Required for Response to Panitumumab or Cetuximab in Metastatic Colorectal Cancer.
Society 26, (2008).
42. Ebos, J.M.L., Lee, C.R. & Kerbel, R.S. Tumor and Host-Mediated Pathways of
Resistance and Disease Progression in Response to Antiangiogenic Therapy. Clinical
Cancer Research 15, 5020-5025(2009).
43. Huth, E. Quantitative evidence for judgments on the efficacy of inoculation for the
prevention of smallpox: England and New England in the 1700s. Journal of the Royal
Society of Medicine 99, 262-6(2006).
44. Janeway, C.A. & Medzhitov, R. Nnate mmune ecognition. 197-
216(2002).doi:10.1146/annurev.immunol.20.083001.084359
45. Matzinger, P. Tolerance, danger, and the extended family. Annual review of
immunology 12, 991-1045(1994).
46. Matzinger, P. The danger model: a renewed sense of self. Science (New York, N.Y.)
296, 301-5(2002).
47. Kanzler, H. et al. Therapeutic targeting of innate immunity with Toll-like receptor
agonists and antagonists. Nature medicine 13, 552-9(2007).
48. Mollen, K.P. et al. Emerging paradigm: toll-like receptor 4-sentinel for the detection of
tissue damage. Shock (Augusta, Ga.) 26, 430-7(2006).
38

49. Jeannin, P., Jaillon, S. & Delneste, Y. Biologie des récepteurs de lʼimmunité innée :
applications cliniques et thérapeutiques. Revue Francophone des laboratoires n° 424
41-51(2010).
50. Biragyn, A. et al. Toll-like receptor 4-dependent activation of dendritic cells by betadefensin
2. Science (New York, N.Y.) 298, 1025-9(2002).
51. Gallucci, S., Lolkema, M. & Matzinger, P. Natural adjuvants: endogenous activators of
dendritic cells. Nature medicine 5, 1249-55(1999).
52. Zheng, H. et al. Cell surface targeting of heat shock protein gp96 induces dendritic cell
maturation and antitumor immunity. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)
167, 6731-5(2001).
53. Iwasaki, A. & Medzhitov, R. Toll-like receptor control of the adaptive immune
responses. Nature immunology 5, 987-95(2004).
54. Palm, N.W. & Medzhitov, R. Pattern recognition receptors and control of adaptive
immunity. Immunological reviews 227, 221-33(2009).
55. Kanzler, H. et al. Therapeutic targeting of innate immunity with Toll-like receptor
agonists and antagonists. Nature Medicine 13, 552-559(2007).
56. Frank, M.M. & Fries, L.F. The role of complement in inflammation and phagocytosis.
Immunology today 12, 322-6(1991).
57. Clos, T.W.D. & Mold, C. C-Reactive Protein. Internal Medicine 261-277(2004).
58. Matsushita, M. Ficolins: complement-activating lectins involved in innate immunity.
Journal of innate immunity 2, 24-32(2009).
59. Ip, W.K.E. et al. Mannose-binding lectin and innate immunity. Immunological Reviews
230, 9-21(2009).
60. Goldsby, R., Kindt, T. & Osborne, B. Immunologie. 4e ed. (2001).
61. Borregaard, N. Neutrophils, from marrow to microbes. Immunity 33, 657-70(2010).
62. Witko-Sarsat, V. et al. Neutrophils: molecules, functions and pathophysiological
aspects. Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology 80,
617-53(2000).
63. Jablonska, J. et al. Neutrophils responsive to endogenous IFN-β regulate tumor
angiogenesis and growth in a mouse tumor model. 120, (2010).
64. Pekarek, L.A. et al. Inhibition of tumor growth by elimination of granulocytes. The
Journal of experimental medicine 181, 435-40(1995).
65. Maher, J.J. & Gores, G.J. Apoptosis: silent killer or neutron bomb? Hepatology
(Baltimore, Md.) 28, 865-7(1998).
39

66. Rhee, S.H., Im, E. & Pothoulakis, C. Toll-like receptor 5 engagement modulates tumor
development and growth in a mouse xenograft model of human colon cancer.
Gastroenterology 135, 518-28(2008).
67. Yoshimura, T., Takahashi, M. & Alerts, E. IFN- γ -Mediated Survival Enables Human
Neutrophils to Produce MCP-1/CCL2 in Response to Activation by TLR Ligands.
(2010).
68. Gabrilovich, D. MECHANISMS AND FUNCTIONAL SIGNIFICANCE OF
TUMOUR- INDUCED DENDRITIC-CELL DEFECTS. Group 4, (2004).
69. Güngör, N. et al. Transcriptional profiling of the acute pulmonary inflammatory
response induced by LPS : role of neutrophils. Respiratory Research 1-10(2010).
70. Yang, D. et al. Human neutrophil defensins selectively chemoattract naive T and
immature dendritic cells brane of microbes . Here we show that human neu- pertussis
toxin-sensitive , suggesting that a G i ␣ pro-. Journal of Leukocyte Biology 68, 9-
14(2000).
71. Wagner, C. et al. Granzyme B and perforin: constitutive expression in human
polymorphonuclear neutrophils. Blood 103, 1099-104(2004).
72. Male, D. et al. Immunologie.7e ed. (2007).
73. Ganz, T., Selsted, M.E. & Lehrer, R.I. Defensins. European journal of haematology 44,
1-8(1990).
74. Souto, J.C., Vila, L. & Bru, A. Polymorphonuclear Neutrophils and Cancer . Intense
and Sustained Neutrophilia as aT reatment Against Solid Tumors. Medicinal Research
Reviews doi:10.1002/med
75. Sutton, V.R., with Joseph A Trapani Granzyme B : pro-apoptotic , antiviral and
antitumor functions. Current Opinion in Immunology 533-
543(2003).doi:10.1016/S0952-7915(03)00107-9
76. Chakravarti, A., Allaeys, I. & Poubelle, P.E. Neutrophile et immunité Est-ce inné ou
acquis? Medecine/Sciences 23, 862-867(2007).
77. Pouniotis, D.S. & Plebanski, M. Alveolar macrophage function is altered in patients
with lung cancer. Clinical and Experimental Immunology 363-
372(2006).doi:10.1111/j.1365-2249.2006.02998.x
78. Diefenbach, A. et al. Ligands for the murine NKG2D receptor: expression by tumor
cells and activation of NK cells and macrophages. Nature immunology 1, 119-
26(2000).
79. López-Larrea, C. et al. The NKG2D receptor: sensing stressed cells. Trends in
molecular medicine 14, 179-89(2008).
40

80. Jakóbisiak, M., Lasek, W. & Goł, J. Natural mechanisms protecting against cancer.
Immunology Letters 90, 103-122(2003).
81. Gordon, S. alternative activation of macrophages. Nature Reviews Immunology 3, 23-
25(2003).
82. Sica, A. et al. Macrophage polarization in tumour progression. Seminars in Cancer
Biology 18, 349-355(2008).
83. Allavena, P. The Yin-Yang of tumor-associated macrophages in neoplastic progression
and immune surveillance. Immunological Reviews 222, 155-161(2008).
84. Mantovani, A. et al. The chemokine system in diverse forms of macrophage activation
and polarization. Trends Immunol. 25, 677-686(2004).
85. Mantovani, A. et al. Tumor-associated macrophages and the related myeloid-derived
suppressor cells as a paradigm of the diversity of macrophage activation. Human
immunology 70, 325-30(2009).
86. Gordon, S. & Martinez, F.O. Alternative Activation of Macrophages : Mechanism and
Functions. Immunity 32, 593-604(2010).
87. Steinle, A. et al. Interactions of human NKG2D with its ligands MICA, MICB, and
homologs of the mouse RAE-1 protein family. Immunogenetics 53, 279-87
88. Bottino, C. et al. Learning how to discriminate between friends and enemies , a lesson
from Natural Killer cells. Molecular Immunology 41, 569-575(2004).
89. Moretta, L. Unravelling natural killer cell function : triggering and inhibitory human
NK receptors. EMBO Journal 23, 255-259(2004).
90. Smyth, M.J. et al. NKT cells — conductors of tumor immunity ? Current Opinion in
Immunology 165-171
91. Soloski, M.J. Recognition of tumor cells by the innate immune system. Current
Opinion in Immunology 154-162(2001).
92. Trinchieri, G. Biology of natural killer cells. Advances in immunology 47, 187-
376(1989).
93. Zamai, B.L. et al. Natural Killer ( NK ) Cell – mediated Cytotoxicity : Differential Use
of TRAIL and Fas Ligand by Immature and Mature Primary Human NK Cells. 188,
2375-2380(1998).
94. Gabrilovich, D.I. & Nagaraj, S. Myeloid-derived suppressor cells as regulators of the
immune system. Nature reviews. Immunology 9, 162-74(2009).
95. Peranzoni, E. et al. Myeloid-derived suppressor cell heterogeneity and subset
definition. Current opinion in immunology 22, 238-44(2010).
41

96. Almand, B. et al. Increased production of immature myeloid cells in cancer patients: a
mechanism of immunosuppression in cancer. Journal of immunology (Baltimore, Md. :
1950) 166, 678-89(2001).
97. Mazzoni, A. et al. Myeloid suppressor lines inhibit T cell responses by an NOdependent
mechanism. Journal of immunology 168, 689-95(2002).
98. Bronte, V. & Zanovello, P. Regulation of immune responses by L-arginine metabolism.
Nature reviews. Immunology 5, 641-54(2005).
99. Rodríguez, P.C. & Ochoa, A.C. Arginine regulation by myeloid derived suppressor
cells and tolerance in cancer: mechanisms and therapeutic perspectives. Immunological
reviews 222, 180-91(2008).
100. Sica, A. & Bronte, V. Altered macrophage differentiation and immune dysfunction in
tumor development. The Journal of clinical investigation 117, 1155-66(2007).
101. Bogdan, C. Nitric oxide and the immune response. Nature immunology 2, 907-
16(2001).
102. Bronte, V. et al. IL-4-induced arginase 1 suppresses alloreactive T cells in tumorbearing
mice. Journal of immunology 170, 270-8(2003).
103. Li, H. et al. Cancer-expanded myeloid-derived suppressor cells induce anergy of NK
cells through membrane-bound TGF-beta 1. Journal of immunology 182, 240-9(2009).
104. Yang, L. et al. Abrogation of TGF beta signaling in mammary carcinomas recruits Gr-
1+CD11b+ myeloid cells that promote metastasis. Cancer cell 13, 23-35(2008).
105. Pan, P.-Y. et al. Immune stimulatory receptor CD40 is required for T-cell suppression
and T regulatory cell activation mediated by myeloid-derived suppressor cells in
cancer. Cancer research 70, 99-108(2010).
106. Serafini, P. et al. Myeloid-derived suppressor cells promote cross-tolerance in B-cell
lymphoma by expanding regulatory T cells. Cancer research 68, 5439-49(2008).
107. Ostrand-Rosenberg, S. & Sinha, P. Myeloid-derived suppressor cells: linking
inflammation and cancer. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 182, 4499-
506(2009).
108. Mellman, I., Steinman, R.M. & Haven, N. Dendritic Cells : Specialized and Regulated
Antigen Minireview. 106, 255-258(2001).
109. Banchereau, J. et al. Imunobiology of dendritic cells. Immunology 767-811(2000).
110. Waldmann, T.A. Immunotherapy: past, present and future. Nature medicine 9, 269-
77(2003).
42

111. Herr, H.W. et al. Bacillus Calmette-Guérin therapy alters the progression of superficial
bladder cancer. Journal of clinical oncology : official journal of the American Society
of Clinical Oncology 6, 1450-5(1988).
112. Alexandroff, A.B. et al. BCG immunotherapy of bladder cancer: 20 years on. Lancet
353, 1689-94(1999).
113. Lamm, D.L. et al. Maintenance bacillus Calmette-Guerin immunotherapy for recurrent
TA, T1 and carcinoma in situ transitional cell carcinoma of the bladder: a randomized
Southwest Oncology Group Study. The Journal of urology 163, 1124-9(2000).
114. Janeway, C.A. How the immune system protects the host from infection. Microbes and
infection / Institut Pasteur 3, 1167-71(2001).
115. Dranoff, G. Cytokines in cancer pathogenesis and cancer therapy. Nature reviews.
Cancer 4, 11-22(2004).
116. Fosså, S.D., Kramar, A. & Droz, J.P. Prognostic factors and survival in patients with
metastatic renal cell carcinoma treated with chemotherapy or interferon-alpha.
European journal of cancer (Oxford, England : 1990) 30A, 1310-4(1994).
117. Kirkwood, J.M., Resnick, G.D. & Cole, B.F. Efficacy, safety, and risk-benefit analysis
of adjuvant interferon alfa-2b in melanoma. Seminars in oncology 24, S16-23(1997).
118. Kirkwood, J. Cancer immunotherapy: the interferon-alpha experience. Seminars in
oncology 29, 18-26(2002).
119. Dutcher, J. Current status of interleukin-2 therapy for metastatic renal cell carcinoma
and metastatic melanoma. Oncology (Williston Park, N.Y.) 16, 4-10(2002).
120. Taneja, S.S. et al. Immunotherapy for renal cell carcinoma: the era of interleukin-2based
treatment. Urology 45, 911-24(1995).
121. Negrier, S. et al. Recombinant human interleukin-2, recombinant human interferon
alfa-2a, or both in metastatic renal-cell carcinoma. Groupe Français dʼImmunothérapie.
The New England journal of medicine 338, 1272-8(1998).
122. Trinchieri, G. & Scott, P. Interleukin-12: basic principles and clinical applications.
Current topics in microbiology and immunology 238, 57-78(1999).
123. Younes, A. et al. Phase II clinical trial of interleukin-12 in patients with relapsed and
refractory non-Hodgkinʼs lymphoma and Hodgkin's disease. Clinical cancer research :
an official journal of the American Association for Cancer Research 10, 5432-8(2004).
124. Erridge, C., Bennett-Guerrero, E. & Poxton, I.R. Structure and function of
lipopolysaccharides. Microbes and infection / Institut Pasteur 4, 837-51(2002).
125. Coley, W.B. The treatment of inoperable sarcoma with the mixed toxins of Erysipelas
and Bacillus prodigious. J. Am. Med. Assoc 31, 389-395(1898).
43

126. Shear, M.J. & Turner, F.C. Chemical treatment of tumors: isolation of hemorrhagicproducing
fraction from Serratia marcescens (Bacillus prodigiosus) culture filtrate. J
Natl Cancer Inst 4, 81-87(1943).
127. Westphal, O. & Lüderitz, O. Chemische Erforschung von Lipopolysacchariden
gramnegativer Bakterien. Angewandte Chemie 66, 407-417(1954).
128. ... Total synthesis of Escherichia coli lipid A. Tetrahedron Letters 26, 1545-
1548(1985).
129. Rietschel, E.T. et al. Bacterial endotoxin: molecular relationships between structure
and activity. Infectious disease clinics of North America 5, 753-79(1991).
130. Rietschel, E.T. et al. Newer aspects of the chemical structure and biological activity of
bacterial endotoxins. Progress in clinical and biological research 189, 31-51(1985).
131. Beutler, B. & Rietschel, E.T. Innate immune sensing and its roots: the story of
endotoxin. Nature reviews. Immunology 3, 169-76(2003).
132. Zähringer, U., Lindner, B. & Rietschel, E.T. Molecular structure of lipid A, the
endotoxic center of bacterial lipopolysaccharides. Advances in carbohydrate chemistry
and biochemistry 50, 211-76(1994).
133. Kilbourn, R.G. et al. Reversal of endotoxin-mediated shock by NG-methyl-L-arginine,
an inhibitor of nitric oxide synthesis. Biochemical and biophysical research
communications 172, 1132-8(1990).
134. Tanamoto, K. et al. Biological activities of synthetic lipid A analogs: pyrogenicity,
lethal toxicity, anticomplement activity, and induction of gelation of Limulus
amoebocyte lysate. Infection and immunity 44, 421-6(1984).
135. Di Padova, F.E. et al. A broadly cross-protective monoclonal antibody binding to
Escherichia coli and Salmonella lipopolysaccharides. Infection and immunity 61, 3863-
72(1993).
136. Jeannin, J.F. et al. Antitumor effect of synthetic derivatives of lipid A in an
experimental model of colon cancer in the rat. Gastroenterology 101, 726-33(1991).
137. Brandenburg, K. et al. Physicochemical characteristics of triacyl lipid A partial
structure OM-174 in relation to biological activity. European journal of biochemistry /
FEBS 267, 3370-7(2000).
138. Wright, S.D. et al. CD14, a receptor for complexes of lipopolysaccharide (LPS) and
LPS binding protein. Science (New York, N.Y.) 249, 1431-3(1990).
139. Libermann, T.A. & Baltimore, D. Activation of interleukin-6 gene expression through
the NF-kappa B transcription factor. Molecular and cellular biology 10, 2327-
34(1990).
44

140. Takai, N. et al. Primary structure of rat CD14 and characteristics of rat CD14, cytokine,
and NO synthase mRNA expression in mononuclear phagocyte system cells in
response to LPS. Journal of leukocyte biology 61, 736-44(1997).
141. Moore, K.J. et al. Divergent response to LPS and bacteria in CD14-deficient murine
macrophages. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 165, 4272-80(2000).
142. Ingalls, R.R., Monks, B.G. & Golenbock, D.T. Membrane expression of soluble
endotoxin-binding proteins permits lipopolysaccharide signaling in Chinese hamster
ovary fibroblasts independently of CD14. The Journal of biological chemistry 274,
13993-8(1999).
143. Akira, S., Uematsu, S. & Takeuchi, O. Pathogen recognition and innate immunity. Cell
124, 783-801(2006).
144. Lauw, F.N., Caffrey, D.R. & Golenbock, D.T. Of mice and man: TLR11 (finally) finds
profilin. Trends in immunology 26, 509-11(2005).
145. Janeway, C.A. & Medzhitov, R. Innate immune recognition. Annual review of
immunology 20, 197-216(2002).
146. Akira, S., Takeda, K. & Kaisho, T. Toll-like receptors: critical proteins linking innate
and acquired immunity. Nature immunology 2, 675-80(2001).
147. Sekine, Y. et al. Modulation of TLR4 signaling by a novel adaptor protein signaltransducing
adaptor protein-2 in macrophages. Journal of immunology (Baltimore, Md.
: 1950) 176, 380-9(2006).
148. Watson, J. & Riblet, R. Genetic control of responses to bacterial lipopolysaccharides in
mice. I. Evidence for a single gene that influences mitogenic and immunogenic
respones to lipopolysaccharides. The Journal of experimental medicine 140, 1147-
61(1974).
149. Poltorak, A. et al. Defective LPS signaling in C3H/HeJ and C57BL/10ScCr mice:
mutations in Tlr4 gene. Science (New York, N.Y.) 282, 2085-8(1998).
150. Hoshino, K. et al. Cutting edge: Toll-like receptor 4 (TLR4)-deficient mice are
hyporesponsive to lipopolysaccharide: evidence for TLR4 as the Lps gene product.
Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 162, 3749-52(1999).
151. Kawasaki, K. et al. Mouse toll-like receptor 4.MD-2 complex mediates
lipopolysaccharide-mimetic signal transduction by Taxol. The Journal of biological
chemistry 275, 2251-4(2000).
152. Ohashi, K. et al. Cutting edge: heat shock protein 60 is a putative endogenous ligand of
the toll-like receptor-4 complex. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 164,
558-61(2000).
45

153. Habich, C. et al. The receptor for heat shock protein 60 on macrophages is saturable,
specific, and distinct from receptors for other heat shock proteins. Journal of
immunology (Baltimore, Md. : 1950) 168, 569-76(2002).
154. Taylor, K.R. et al. Hyaluronan fragments stimulate endothelial recognition of injury
through TLR4. The Journal of biological chemistry 279, 17079-84(2004).
155. Taylor, K.R. et al. Recognition of hyaluronan released in sterile injury involves a
unique receptor complex dependent on Toll-like receptor 4, CD44, and MD-2. The
Journal of biological chemistry 282, 18265-75(2007).
156. Shin, H.J. et al. Kinetics of binding of LPS to recombinant CD14, TLR4, and MD-2
proteins. Molecules and cells 24, 119-24(2007).
157. Jiang, Q. et al. Lipopolysaccharide induces physical proximity between CD14 and tolllike
receptor 4 (TLR4) prior to nuclear translocation of NF-kappa B. Journal of
immunology (Baltimore, Md. : 1950) 165, 3541-4(2000).
158. Silva Correia, J. da & Ulevitch, R.J. MD-2 and TLR4 N-linked glycosylations are
important for a functional lipopolysaccharide receptor. The Journal of biological
chemistry 277, 1845-54(2002).
159. Akashi, S. et al. Human MD-2 confers on mouse Toll-like receptor 4 species-specific
lipopolysaccharide recognition. International immunology 13, 1595-9(2001).
160. OʼNeill, L.A.J. & Bowie, A.G. The family of five: TIR-domain-containing adaptors in
Toll-like receptor signalling. Nature reviews. Immunology 7, 353-64(2007).
161. Guha, M. et al. Molecular mechanisms of tumor necrosis factor alpha gene expression
in monocytic cells via hyperglycemia-induced oxidant stress-dependent and -
independent pathways. The Journal of biological chemistry 275, 17728-39(2000).
162. Takeda, K. & Akira, S. Toll-like receptors in innate immunity. International
immunology 17, 1-14(2005).
163. Yamamoto, M. & Akira, S. Lipid A receptor TLR4-mediated signaling pathways.
Advances in experimental medicine and biology 667, 59-68(2009).
164. Lien, E. et al. A novel synthetic acyclic lipid A-like agonist activates cells via the
lipopolysaccharide/toll-like receptor 4 signaling pathway. The Journal of biological
chemistry 276, 1873-80(2001).
165. Rasool, O. et al. Effect of Brucella abortus lipopolysaccharide on oxidative metabolism
and lysozyme release by human neutrophils. Infection and immunity 60, 1699-
702(1992).
166. Dunzendorfer, S. et al. TLR4 is the signaling but not the lipopolysaccharide uptake
receptor. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 173, 1166-70(2004).
46

167. Feist, W. et al. Induction of tumor necrosis factor-alpha release by lipopolysaccharide
and defined lipopolysaccharide partial structures. Immunobiology 179, 293-307(1989).
168. Ogawa, T. et al. Immunobiological activities of chemically defined lipid A from
Helicobacter pylori LPS in comparison with Porphyromonas gingivalis lipid A and
Escherichia coli-type synthetic lipid A (compound 506). Vaccine 15, 1598-605(1997).
169. Kotani, S. et al. Synthetic lipid A with endotoxic and related biological activities
comparable to those of a natural lipid A from an Escherichia coli re-mutant. Infection
and immunity 49, 225-37(1985).
170. Galanos, C. et al. Immunogenic properties of lipid A. Reviews of infectious diseases 6,
546-52
171. Saha, D.C. et al. Monophosphoryl lipid A stimulated up-regulation of reactive oxygen
intermediates in human monocytes in vitro. Journal of leukocyte biology 70, 381-
5(2001).
172. Dahinden, C.A., Fehr, J. & Hugli, T.E. Role of cell surface contact in the kinetics of
superoxide production by granulocytes. The Journal of clinical investigation 72, 113-
21(1983).
173. Saha, D.C. et al. Monophosphoryl lipid A stimulated up-regulation of nitric oxide
synthase and nitric oxide release by human monocytes in vitro. Immunopharmacology
37, 175-84(1997).
174. Tanamoto, K. et al. Endotoxic properties of free lipid A from Porphyromonas
gingivalis. Microbiology (Reading, England) 143 ( Pt 1, 63-71(1997).
175. Aybay, C. & Imir, T. Comparison of the effects of Salmonella minnesota Re595
lipopolysaccharide, lipid A and monophosphoryl lipid A on nitric oxide, TNF-alpha,
and IL-6 induction from RAW 264.7 macrophages. FEMS immunology and medical
microbiology 22, 263-73(1998).
176. López-Urrutia, L. et al. Lipopolysaccharides of Brucella abortus and Brucella
melitensis induce nitric oxide synthesis in rat peritoneal macrophages. Infection and
immunity 68, 1740-5(2000).
177. Ogawa, T., Uchida, H. & Amino, K. Immunobiological activities of chemically defined
lipid A from lipopolysaccharides of Porphyromonas gingivalis. Microbiology
(Reading, England) 140 ( Pt 5, 1209-16(1994).
178. Ismaili, J. et al. Monophosphoryl lipid A activates both human dendritic cells and T
cells. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 168, 926-32(2002).
179. Brunda, M.J. et al. Enhanced antitumor efficacy in mice by combination treatment with
interleukin-1 alpha and interferon-alpha. Journal of immunotherapy with emphasis on
tumor immunology : official journal of the Society for Biological Therapy 15, 233-
41(1994).
47

180. Vosika, G.J., Barr, C. & Gilbertson, D. Phase-I study of intravenous modified lipid A.
Cancer immunology, immunotherapy : CII 18, 107-12(1984).
181. Kiani, a et al. Downregulation of the proinflammatory cytokine response to endotoxin
by pretreatment with the nontoxic lipid A analog SDZ MRL 953 in cancer patients.
Blood 90, 1673-83(1997).
182. Bono, J.S. de et al. Phase I study of ONO-4007, a synthetic analogue of the lipid A
moiety of bacterial lipopolysaccharide. Clinical cancer research : an official journal of
the American Association for Cancer Research 6, 397-405(2000).
183. Onier, N. et al. Cure of colon cancer metastasis in rats with the new lipid A OM 174.
Apoptosis of tumor cells and immunization of rats. Clinical & experimental metastasis
17, 299-306(1999).
184. Onier, N. et al. Expression of inducible nitric oxide synthase in tumors in relation with
their regression induced by lipid A in rats. International journal of cancer. Journal
international du cancer 81, 755-60(1999).
185. Lagadec, P. et al. Evidence for control of nitric oxide synthesis by intracellular
transforming growth factor-beta1 in tumor cells. Implications for tumor development.
The American journal of pathology 154, 1867-76(1999).
186. Gauthier, N. et al. Tumour-derived and host-derived nitric oxide differentially regulate
breast carcinoma metastasis to the lungs. Carcinogenesis 25, 1559-65(2004).
187. Martin, M.S. et al. An experimental model for cancer of the colon and rectum.
Intestinal carcinoma induced in the rat 1,2-dimethylhydrazine. Digestion 8, 22-
34(1973).
188. Martin, F. et al. Selection by trypsin of two sublines of rat colon cancer cells forming
progressive or regressive tumors. International journal of cancer. Journal international
du cancer 32, 623-7(1983).
189. Shibata, F. [The role of rat cytokine-induced neutrophil chemoattractants (CINCs) in
inflammation]. Yakugaku zasshi : Journal of the Pharmaceutical Society of Japan 122,
263-8(2002).
190. Hibbs, J.B., Taintor, R.R. & Vavrin, Z. Macrophage cytotoxicity: role for L-arginine
deiminase and imino nitrogen oxidation to nitrite. Science (New York, N.Y.) 235, 473-
6(1987).
191. Hibbs, J.B., Vavrin, Z. & Taintor, R.R. L-arginine is required for expression of the
activated macrophage effector mechanism causing selective metabolic inhibition in
target cells. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 138, 550-65(1987).
192. Nicolas, A. et al. Dendritic cells trigger tumor cell death by a nitric oxide-dependent
mechanism. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 179, 812-8(2007).
48

193. Fridlender, Z.G. et al. Polarization of tumor-associated neutrophil phenotype by TGFbeta:
“N1” versus “N2” TAN. Cancer cell 16, 183-94(2009).
194. Grossman, W.J. & Ley, T.J. Granzymes A and B are not expressed in human
neutrophils. Blood 104, 906-8(2004).
195. Metkar, S.S. & Froelich, C.J. Human neutrophils lack granzyme A, granzyme B, and
perforin. Blood 104, 905-8(2004).
196. Hochegger, K., Eller, P. & Rosenkranz, A.R. Granzyme A: an additional weapon of
human polymorphonuclear neutrophils (PMNs) in innate immunity? Blood 103,
1176(2004).
197. Martin, P. et al. Quiescent and activated mouse granulocytes do not express granzyme
A and B or perforin: similarities or differences with human polymorphonuclear
leukocytes? Blood 106, 2871-8(2005).
198. Afonina, I.S., Cullen, S.P. & Martin, S.J. Cytotoxic and non-cytotoxic roles of the
CTL/NK protease granzyme B. Immunological reviews 235, 105-16(2010).
199. Salcedo, T.W. et al. Modulation of perforin and granzyme messenger RNA expression
in human natural killer cells. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 151,
2511-20(1993).
200. Zhang, B., Zhang, J. & Tian, Z. Comparison in the effects of IL-2, IL-12, IL-15 and
IFNalpha on gene regulation of granzymes of human NK cell line NK-92. International
immunopharmacology 8, 989-96(2008).
201. Brady, J. et al. IL-21 induces the functional maturation of murine NK cells. Journal of
immunology (Baltimore, Md. : 1950) 172, 2048-58(2004).
202. Fehniger, T. a et al. Acquisition of murine NK cell cytotoxicity requires the translation
of a pre-existing pool of granzyme B and perforin mRNAs. Immunity 26, 798-
811(2007).
203. Wei, S. et al. Activation of tumor necrosis factor-alpha production from human
neutrophils by IL-2 via IL-2-R beta. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)
150, 1979-87(1993).
204. Ethuin, F. et al. Human neutrophils produce interferon gamma upon stimulation by
interleukin-12. Laboratory investigation; a journal of technical methods and pathology
84, 1363-71(2004).
205. Cassatella, M.A. et al. Interferon-gamma activates human neutrophil oxygen
metabolism and exocytosis. Immunology 63, 499-506(1988).
206. Chauffert, B. et al. [Experimental chemotherapy of peritoneal carcinomatosis of
colonic origin in rats]. Gastroentérologie clinique et biologique 16, 215-9(1992).
49

207. Nozawa, H., Chiu, C. & Hanahan, D. Infiltrating neutrophils mediate the initial
angiogenic switch in a mouse model of multistage carcinogenesis. Proceedings of the
National Academy of Sciences of the United States of America 103, 12493-8(2006).
208. Mantovani, A. et al. The chemokine system in cancer biology and therapy. Cytokine &
growth factor reviews 21, 27-39(2010).
209. Burdon, P.C.E., Martin, C. & Rankin, S.M. The CXC chemokine MIP-2 stimulates
neutrophil mobilization from the rat bone marrow in a CD49d-dependent manner.
Blood 105, 2543-8(2005).
210. Burdon, P.C.E., Martin, C. & Rankin, S.M. Migration across the sinusoidal
endothelium regulates neutrophil mobilization in response to ELR + CXC chemokines.
British journal of haematology 142, 100-8(2008).
211. Wengner, A.M. et al. The coordinated action of G-CSF and ELR + CXC chemokines in
neutrophil mobilization during acute inflammation. Blood 111, 42-9(2008).
212. Zarbock, A. & Ley, K. Neutrophil adhesion and activation under flow.
Microcirculation (New York, N.Y. : 1994) 16, 31-42(2009).
213. Rittner, H.L. et al. Selective local PMN recruitment by CXCL1 or CXCL2 / 3 injection
does not cause inflammatory pain. Journal of Leukocyte Biology 79, 1022-1032(2006).
214. Guicciardi, M.E. & Gores, G.J. Life and death by death receptors. The FASEB
journalgro 23, 1625-37(2009).
215. Lieberman, J. The ABCs of granule-mediated cytotoxicity: new weapons in the arsenal.
Nature reviews. Immunology 3, 361-70(2003).
216. Saint Basile, G. de, Ménasché, G. & Fischer, A. Molecular mechanisms of biogenesis
and exocytosis of cytotoxic granules. Nature Reviews Immunology 10, 568-79(2010).
217. Laforge, M. et al. Apoptotic death concurrent with CD3 stimulation in primary human
CD8+ T lymphocytes: a role for endogenous granzyme B. Journal of immunology 176,
3966-77(2006).
218. Wagner, C., Stegmaier, S. & Hänsch, G.M. Expression of granzyme B in peripheral
blood polymorphonuclear neutrophils (PMN), myeloid cell lines and in PMN derived
from haemotopoietic stem cells in vitro. Molecular immunology 45, 1761-6(2008).
219. Wittamer, V. et al. Neutrophil-mediated maturation of chemerin : a link between innate
and adaptative immunity. The Journal of Immunology 175, 487-493(2005).
220. Cassatella, M.A. The production of cytokines by polymorphonuclear neutrophils.
Immunology today 16, 21-26(1995).
221. Gosselin, E.J. et al. Induction of MHC class II on human polymorphonuclear
neutrophils by granulocyte/macrophage colony-stimulating factor, IFN-gamma, and IL-
3. Journal of immunology 151, 1482-1490(1993).
50

222. Ishikawa, F. & Miyazaki, S. New biodefense strategies by neutrophils. Archivum
immunologiae et therapiae experimentalis 53, 226-33(2005).
223. Pajak, B. et al. The adjuvant OM-174 induces both the migration and maturation of
murine dendritic cells in vivo. Vaccine 21, 836-42(2003).
224. Bennouna, S. & Denkers, E.Y. Microbial antigen triggers rapid mobilization of TNFalpha
to the surface of mouse neutrophils transforming them into inducers of high-level
dendritic cell TNF-alpha production. Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)
174, 4845-51(2005).
225. Gautier, T. et al. Innate immune response triggered by triacyl lipid A is dependent on
phospholipid transfer protein (PLTP) gene expression. FASEB J. 24, 3544-54(2010).
226. Orucevic, A. & Lala, P.K. Effects of N(g)-methyl-L-arginine, an inhibitor of nitric
oxide synthesis, on interleukin-2-induced capillary leakage and antitumor responses in
healthy and tumor-bearing mice. Cancer immunology, immunotherapy : CII 42, 38-
46(1996).
227. Rosbe, K.W. et al. Immunohistochemical characterization of nitric oxide synthase
activity in squamous cell carcinoma of the head and neck. Otolaryngology--head and
neck surgery : official journal of American Academy of Otolaryngology-Head and
Neck Surgery 113, 541-9(1995).
228. Lejeune, P. et al. Nitric oxide involvement in tumor-induced immunosuppression.
Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950) 152, 5077-83(1994).
229. Dimri, G.P. et al. A biomarker that identifies senescent human cells in culture and in
aging skin in vivo. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United
States of America 92, 9363-7(1995).
230. Poele, R.H. te et al. DNA damage is able to induce senescence in tumor cells in vitro
and in vivo. Cancer research 62, 1876-83(2002).
231. Schmitt, C.A. Cellular senescence and cancer treatment. Biochimica et biophysica acta
1775, 5-20(2007).
232. Elmore, L.W. et al. Adriamycin-induced senescence in breast tumor cells involves
functional p53 and telomere dysfunction. The Journal of biological chemistry 277,
35509-15(2002).
233. Wang, X.-dan et al. [Changes of STAT3 in cell replicative senescence and effects of
angiotensin II on STAT3]. Zhonghua yi xue za zhi 83, 324-7(2003).
234. Roberson, R.S. et al. Escape from therapy-induced accelerated cellular senescence in
p53-null lung cancer cells and in human lung cancers. Cancer research 65, 2795-
803(2005).
51

235. Huerta-Yepez, S. et al. Nitric oxide sensitizes prostate carcinoma cell lines to TRAILmediated
apoptosis via inactivation of NF-kappa B and inhibition of Bcl-xl expression.
Oncogene 23, 4993-5003(2004).
236. Millet, A. et al. Influence of the nitric oxide donor glyceryl trinitrate on apoptotic
pathways in human colon cancer cells. Gastroenterology 123, 235-46(2002).
237. Gordon, S. et al. Transcription factor YY1: structure, function, and therapeutic
implications in cancer biology. Oncogene 25, 1125-42(2006).
238. Medema, J.P. et al. Blockade of the granzyme B/perforin pathway through
overexpressionof the serine protease inhibitor PI-9/SPI-6 constitutes a mechanism for
immune escape by tumors. Immunology (2001).
239. Kim, G.P. et al. Phase III noninferiority trial comparing irinotecan with oxaliplatin,
fluorouracil, and leucovorin in patients with advanced colorectal carcinoma previously
treated with fluorouracil: N9841. Journal of clinical oncology : official journal of the
American Society of Clinical Oncology 27, 2848-54(2009).
240. Shirota, Y. et al. ERCC1 and thymidylate synthase mRNA levels predict survival for
colorectal cancer patients receiving combination oxaliplatin and fluorouracil
chemotherapy. Journal of Clinical Oncology 19, 4298-304(2001).
52