UNIVERSITÉ PAUL CÉZANNE, AIX MARSEILLE III - IMEP

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2.5. Conclusion de l’analyse bibliographique ............................................................... 30 3. MATERIEL ET METHODES ...................................................................................... 33 3.1. Les substrats oléicoles de culture ........................................................................... 33 3.1.1. La description de l'unité de trituration semi industrielle ............................. 33 3.1.2. L’origine du substrat ....................................................................................... 34 3.1.3. La préparation et le conditionnement du substrat ........................................ 35 3.2. Les souches utilisées................................................................................................. 35 3.3. Les milieux de culture ............................................................................................. 36 3.3.1. Les milieux d'entretien ..................................................................................... 36 3.3.2. Les milieux gélosés de criblage des souches ................................................... 36 3.3.3. Les milieux à base de céréale pour la culture Spawn .................................... 36 3.4. Les stratégies d'inoculation..................................................................................... 37 3.4.1. L’inoculation par carrés de milieux gélosés ................................................... 37 3.4.2. L’inoculation sur feuille de cellophane........................................................... 37 3.4.3. L’inoculation par grain de céréales ................................................................ 38 3.5. La mise en œuvre des FMS ..................................................................................... 39 3.5.1. La préparation du substrat oléicole ................................................................ 39 3.5.2. Les cultures en Erlenmeyer ............................................................................. 39 3.5.3. Les cultures en colonnes de Raimbault .......................................................... 39 3.5.4. La régulation des paramètres de FMS ........................................................... 40 3.5.5. La description et le fonctionnement du PNEO .............................................. 40 3.6. L’échantillonnage et le traitement des échantillons en FMS ............................... 42 3.7. Les techniques d’analyse ......................................................................................... 42
3.7.1. La mesure de l’humidité .................................................................................. 42 3.7.2. La mesure du pH .............................................................................................. 43 3.7.3. La mesure de la croissance apicale ................................................................. 43 3.7.4. L’estimation indirecte de la biomasse par analyse de l’ergostérol .............. 43 3.7.4.1. Extraction de l’ergostérol ............................................................................ 43 3.7.4.2. Dosage de l’ergostérol en HPLC ................................................................. 43 3.7.5. Le dosage des sucres réducteurs ..................................................................... 44 3.7.6. Le dosage des sucres totaux ............................................................................. 44 3.7.7. Le dosage des phénols totaux .......................................................................... 44 3.7.8. Le dosage des activités enzymatiques ............................................................. 45 3.7.8.1. Activité Laccase ............................................................................................ 45 3.7.8.2. Activité Mn peroxydase................................................................................ 45 3.7.8.3. Activité Lignine peroxydase ........................................................................ 45 3.7.8.4. Activité tannase ............................................................................................. 45 3.7.8.5. Activité lipase ................................................................................................ 46 3.7.9. L’analyse des monomères phénoliques par HPLC ....................................... 46 3.7.10. Les analyses élémentaires : C et N .................................................................. 47 3.7.11. La résonance magnétique nucléaire 13 C du solide ......................................... 47 Chapitre I .................................................................................................................................. 51 Criblage des souches de Lentinula edodes cultivées sur des margines d’olive en culture solide et liquide pour la biodégradation des polyphénols ................................................... 51 Chapitre II ................................................................................................................................ 70 Optimisation de la production de l’inoculum (spawn) de Lentinula edodes sur les grains de blé (Ebly®) ......................................................................................................................... 70
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