UNIVERSITÉ PAUL CÉZANNE, AIX MARSEILLE III - IMEP

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Matériel et Méthodes Tableau 10. Conditions d’élution pour la détection des monomères phénoliques. Condition Solvant A (%) Solvant B (%) Temps (min) 3.7.10. Les analyses élémentaires : C et N Les teneurs en C et N, dans les échantillons de culture de L. edodes, ont été déterminées à l’aide d’un analyseur élémentaire (Flash EA 1212 Elemental Analyzer, France). Les échantillons ont été finement broyés, pesés et placés dans l’analyseur. L’analyseur a été calibré avec l’acide aspartique à différentes concentrations. 3.7.11. La résonance magnétique nucléaire 13 C du solide Les spectres haute résolution ont été réalisés sur le spectromètre Bruker DSX 400 kHz du Spectropole (Université Paul Cézanne). Les spectres 13 C CP/MAS ont été enregistrés à la fréquence de 100,7 MHz avec découplage du proton. Environ 300 mg de substrat fermenté sont placés dans une sonde de 7 mm inclinée à l’angle magique (angle de 54,7° par rapport au champ magnétique statique) tournant à 6 kHz. Les paramètres d’acquisition utilisés pour un enregistrement optimal sont une impulsion de 90° pour le proton de 2,8 µs, un délai de répétition de 3 s, un nombre d’acquisition de 2000, et enfin un temps de contact de 2 ms. La déconvolution des spectres a été effectuée grâce au logiciel DmFit (Massiot et al., 2002). Le Tableau 11 et la Figure 14 présentent les principales régions obtenues en RMN du 13 C, et attribuées aux différents groupes fonctionnels trouvés dans la matière organique des litières et de compost. isocratique 80 20 10 linéaire 60 40 15 linéaire 45 65 20 linéaire 25 75 30 linéaire 0 100 45 isocratique 0 100 50 47
Matériel et Méthodes Tableau 11 . Attribution des régions RMN 13 C aux différents groupes fonctionnels trouvés dans la matière organique. Shift chimiques Désignation (ppm) Composés 0-45 Alkyle C Lipides, acides aminés, 45-60 N-Alkyle/méthoxyle C Acides aminés, (OCH3- lignine) 60-110 O-Alkyle C Cellulose, hémicelluloses, autres polysaccharides 110-145 Aryle C Polyphénols, Lignine (C aromatique) 145-165 O-Aryle C Phénols, lignine (C phénolique) 165-190 Carboxyle C acides organiques, amide et ester C Figure 14. Exemple de spectre CPMAS RMN 13 C d’une litière de Quercus ilex L. (Alarcon-Gutierrez, 2007). 48
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Je remercie le Dr. Antonis PHILIPPO
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