UNIVERSITÉ PAUL CÉZANNE, AIX MARSEILLE III - IMEP

3.4. Les stratégies d'inoculation
Matériel et Méthodes
Pour initier la culture des champignons supérieurs au laboratoire, on utilise toujours du
mycélium obtenu sur différents milieux de culture (Sobal, 2002). Cet inoculum peut provenir
d’un milieu gélosé ou de grains de céréales colonisés pour une inoculation industrielle à
grande échelle. La taille de l’inoculum a été exprimée soit en nombre de carrés de milieu
gélosé déposés sur le milieu gélosé, soit en pourcentage (% ; poids/poids) pour le spawn
introduit dans les colonnes de Raimbault contenant le substrat.
3.4.1. L’inoculation par carrés de milieux gélosés
À l’aide d’un emporte pièce et d’un pic stériles, un disque de gélose PDA a été prélevé
dans la partie où le mycélium du champignon est le plus jeune. Ce morceau de mycélium a été
ensuite utilisé pour ensemencer la gélose vierge d’une boîte de Petri ou pilulier pour assurer le
repiquage et la conservation des souches. Les morceaux de gélose ont été aussi utilisés pour
l’inoculation des grains de blé pour la préparation du spawn, et pour l’inoculation des
Erlenmeyers pour la culture en milieu liquide. L’incubation a été réalisée dans une étuve à
25±2°C pour les milieux solides, alors que les Erlenmeyers sont incubés sous agitation de
100-120 rpm à la même température.
3.4.2. L’inoculation sur feuille de cellophane
Pour l’étude physiologique des souches, on a adopté la technique de papier cellophane
(De Araujo et al., 2000). Cette technique permet la séparation du mycélium, pour déterminer
la biomasse et sa composition chimique, du milieu de culture qui sert à déterminer les
caractéristiques physiologiques du mycélium. Cette technique est décrite en détail ci-après.
Préparation des feuilles de cellophane: les disques de film de cellophane d’un
diamètre légèrement inférieur de celui de la boîte de Pétri ont été coupés en série. Ils ont été
par la suite placés dans un bocal remplie d’eau, afin d’éviter le dessèchement des feuilles de
cellophane lors de l’autoclavage. La stérilisation a été faite à 120°C pendant 20 min. Une fois
les disques refroidis, ils ont été placés à la surface de la gélose, et laissés pendant 30 min pour
assurer une bonne adhésion de la feuille de cellophane.
Inoculation des cultures sur cellophane et incubation: Le mode d’inoculation de la
surface gélosée a été le même que pour la production d’inoculum en utilisant du milieu PDA.
Un carré d’inoculum gélosé contenant du mycélium est déposé au centre de la boîte de Petri
sur un disque de cellophane préalablement placé stérilement sur la gélose. Les cultures ont été
incubées à 25°C pendant 21 jours.
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