UNIVERSITÉ PAUL CÉZANNE, AIX MARSEILLE III - IMEP

3.3. Les milieux de culture
3.3.1. Les milieux d'entretien
Matériel et Méthodes
Les souches ont été repiquées régulièrement et conservées sur milieu PDA (Sigma) et
PDA avec 10% des margines. Trente neuf grammes de Patate Dextrose Agar (PDA) ont été
dissous dans un litre d’eau distillée en absence ou présence de margines. Le milieu a été porté
à ébullition et stérilisé à 120°C pendant 20 min et distribué en boîtes de Petri (9 cm) à raison
de 20 mL par boîte. Les cultures ont été incubées à 25°C jusqu'à la colonisation complète de
la surface gélosée et ensuite conservées à 4°C pendant 4-6 mois. Le mycélium de différents
âges, obtenu dans ces conditions, a été utilisé pour inoculer le milieu Ebly® (grains de blé
achetés auprès du supermarché Casino, France) et la culture en milieu liquide.
3.3.2. Les milieux gélosés de criblage des souches
Le même milieu d’entretien PDA (Sigma, France) qui a été utilisé pour conserver les
souches et pour produire l’inoculum, a été également utilisé pour caractériser les souches en
mesurant la croissance apicale, la morphologie de la colonie et la biomasse produite. De la
même façon, le milieu PDA + 10% de margines a été préparé en ajoutant 39 g.L -1 de PDA à
un mélange de 100 mL de margines et 900 mL d’eau et il a été aussi utilisé pour caractériser
les souches. Le milieu ME (Extrait de Malt, 24 g.L -1 ) a été utilisé pour réaliser des cultures en
milieu liquide.
3.3.3. Les milieux à base de céréale pour la culture Spawn 1
Le blé de marque Ebly® (Casino, France) a été utilisé comme substrat pour la
production d’inoculum et la culture mycélienne de L. edodes en FMS. Il s’agit d’un produit
standard commercialisé en grande surface. Deux types de Spawn ont été préparés, le Spawn
blanc et le Spawn gris. La préparation du substrat a été réalisée de la manière suivante : dans
un saladier on a introduit 250 mL d’eau, sans ou avec 10% de margines, portée à ébullition,
une quantité de 250 g d’Ebly® a été ajoutée pour préparer le Spawn blanc et gris
respectivement. On a laissé reposer le mélange pendant 5 min pour assurer l’absorption totale
de l’eau. Ensuite, l’Ebly® humidifié a été réparti dans des récipients à fermeture hermétique
et stérilisé à 120°C pendant 30 min.
1 Dans notre étude, on appelle Spawn tout mycélium cultivé sur les grains de céréales.
36