UNIVERSITÉ PAUL CÉZANNE, AIX MARSEILLE III - IMEP

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3.1.3. La préparation et le conditionnement du substrat Matériel et Méthodes Après 24 heures de récupération des échantillons, les margines qui sont restées intactes ont été homogénéisées, et réparties de nouveau dans les bidons de 10 litres. Les margines ont été stockées dans un congélateur à -20°C jusqu'à leur départ vers Marseille. Les grignons d’olive ont subi un séchage sous serre pour diminuer leur humidité de 35% à 10%, pour assurer leur conservation. Les grignons d’olive ont été séchés sous serre à l'obscurité. Un contrôle de l'humidité a été fait chaque jour pour atteindre 10% d'humidité. Le conditionnement des grignons séchés a été fait dans des sacs en plastique. 3.2. Les souches utilisées Les 16 souches de champignons supérieurs comestibles de L. edodes utilisées dans notre étude proviennent de la collection du Laboratoire de recherche « Athens Mushroom Research Laboratory, AMRL » dirigé par le Dr. Philippoussis en Grèce ainsi que de la collection du laboratoire de Mycologie et Sécurité des Aliments de l’INRA-Bordeaux dirigé par le Dr. Savoie. La liste complète des souches utilisées dans ce travail est reportée dans le Tableau 8. Tableau 8. Liste des espèces et origine des souches de champignons comestibles étudiées. Souches Origine Provenance Le 118 AMRL* Chine Le 119 AMRL Chine Le 120 AMRL Chine Le 121 AMRL Europe Le 122 AMRL Europe Le 123 AMRL Europe Le 124 AMRL Taïwan Le 125 Souche commerciale Osaka Japon Le 126 Souche commerciale Osaka Japon Le 127 Souche commerciale France Mycélium Le 128 Souche commerciale France Le Champion Le 129 Souche commerciale Belgique Mycelia Le 130 Souche commerciale USA, Lamber spawn Le 131 Souche commerciale Japon Le 132 Souche hybride INRA France Le 133 Homocaryon d’une souche commerciale Le Lion France 35
3.3. Les milieux de culture 3.3.1. Les milieux d'entretien Matériel et Méthodes Les souches ont été repiquées régulièrement et conservées sur milieu PDA (Sigma) et PDA avec 10% des margines. Trente neuf grammes de Patate Dextrose Agar (PDA) ont été dissous dans un litre d’eau distillée en absence ou présence de margines. Le milieu a été porté à ébullition et stérilisé à 120°C pendant 20 min et distribué en boîtes de Petri (9 cm) à raison de 20 mL par boîte. Les cultures ont été incubées à 25°C jusqu'à la colonisation complète de la surface gélosée et ensuite conservées à 4°C pendant 4-6 mois. Le mycélium de différents âges, obtenu dans ces conditions, a été utilisé pour inoculer le milieu Ebly® (grains de blé achetés auprès du supermarché Casino, France) et la culture en milieu liquide. 3.3.2. Les milieux gélosés de criblage des souches Le même milieu d’entretien PDA (Sigma, France) qui a été utilisé pour conserver les souches et pour produire l’inoculum, a été également utilisé pour caractériser les souches en mesurant la croissance apicale, la morphologie de la colonie et la biomasse produite. De la même façon, le milieu PDA + 10% de margines a été préparé en ajoutant 39 g.L -1 de PDA à un mélange de 100 mL de margines et 900 mL d’eau et il a été aussi utilisé pour caractériser les souches. Le milieu ME (Extrait de Malt, 24 g.L -1 ) a été utilisé pour réaliser des cultures en milieu liquide. 3.3.3. Les milieux à base de céréale pour la culture Spawn 1 Le blé de marque Ebly® (Casino, France) a été utilisé comme substrat pour la production d’inoculum et la culture mycélienne de L. edodes en FMS. Il s’agit d’un produit standard commercialisé en grande surface. Deux types de Spawn ont été préparés, le Spawn blanc et le Spawn gris. La préparation du substrat a été réalisée de la manière suivante : dans un saladier on a introduit 250 mL d’eau, sans ou avec 10% de margines, portée à ébullition, une quantité de 250 g d’Ebly® a été ajoutée pour préparer le Spawn blanc et gris respectivement. On a laissé reposer le mélange pendant 5 min pour assurer l’absorption totale de l’eau. Ensuite, l’Ebly® humidifié a été réparti dans des récipients à fermeture hermétique et stérilisé à 120°C pendant 30 min. 1 Dans notre étude, on appelle Spawn tout mycélium cultivé sur les grains de céréales. 36
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