(Thèse partie 1)
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Matériel et Méthodes<br />
La production d’acides à partir des sucres et d’alcools est faite sur les milieux<br />
liquides précédemment décrits non tamponnés. L’acidification du milieu après culture est<br />
mesurée par un pH-mètre.<br />
3. 4. Caractérisation biochimique<br />
La réduction des nitrates est détectée par utilisation d’acide sulphanilique et -<br />
naphtylamine selon Smibert et Krieg (1981). La production d’indole et l’hydrolyse de<br />
l’amidon et de l’esculine sont réalisées selon la méthode décrite par Gonzalez et al. (1978).<br />
L’hydrolyse de la gélatine, du Tween 20, du Tween 40, du Tween 60 et du Tween 80 est<br />
testée selon la technique de Gutiérrez et Gonzalez (1972). La production de la catalase et<br />
du cytochrome oxydase est étudiée selon Gerhardt et al. (1994). La croissance en<br />
anaérobiose sur L-arginine est mesurée par turbidimétrie à 600 nm en milieu liquide à<br />
raison de 5 g. l -1 d’Arginine-HCl (Oren & Litchfield, 1999).<br />
3. 5. Sensibilité aux antibiotiques<br />
Cette étude est réalisée par utilisation de disques imprégnés d’antibiotiques (Oren et<br />
al., 1997 ; Duckworth et al., 2000). La souche est considérée sensible si la zone<br />
d’inhibition dépasse au moins deux mm autour du disque après 14 jours d’incubation à<br />
37°C (Bonelo et al., 1984). Les antibiotiques étudiés sont : la pénicilline (10 UI), le<br />
chloramphénicol (30 g), l’ampicilline (30 g), la rifampicine (30 g), la streptomycine<br />
(10 UI), la néomycine (30 g), la novobiocine (30 g) et la bacitracine (10 g).<br />
3. 6. Chimiotaxonomie<br />
3. 6. 1. Analyse des lipides polaires membranaires archéens<br />
Les lipides polaires membranaires archéenes sont extraits et analysés par<br />
chromatographie sur couche mince selon la méthode décrite par Oren et al. (1996).