(Thèse partie 1)

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Matériel et Méthodes
La production d’acides à partir des sucres et d’alcools est faite sur les milieux
liquides précédemment décrits non tamponnés. L’acidification du milieu après culture est
mesurée par un pH-mètre.
3. 4. Caractérisation biochimique
La réduction des nitrates est détectée par utilisation d’acide sulphanilique et -
naphtylamine selon Smibert et Krieg (1981). La production d’indole et l’hydrolyse de
l’amidon et de l’esculine sont réalisées selon la méthode décrite par Gonzalez et al. (1978).
L’hydrolyse de la gélatine, du Tween 20, du Tween 40, du Tween 60 et du Tween 80 est
testée selon la technique de Gutiérrez et Gonzalez (1972). La production de la catalase et
du cytochrome oxydase est étudiée selon Gerhardt et al. (1994). La croissance en
anaérobiose sur L-arginine est mesurée par turbidimétrie à 600 nm en milieu liquide à
raison de 5 g. l -1 d’Arginine-HCl (Oren & Litchfield, 1999).
3. 5. Sensibilité aux antibiotiques
Cette étude est réalisée par utilisation de disques imprégnés d’antibiotiques (Oren et
al., 1997 ; Duckworth et al., 2000). La souche est considérée sensible si la zone
d’inhibition dépasse au moins deux mm autour du disque après 14 jours d’incubation à
37°C (Bonelo et al., 1984). Les antibiotiques étudiés sont : la pénicilline (10 UI), le
chloramphénicol (30 g), l’ampicilline (30 g), la rifampicine (30 g), la streptomycine
(10 UI), la néomycine (30 g), la novobiocine (30 g) et la bacitracine (10 g).
3. 6. Chimiotaxonomie
3. 6. 1. Analyse des lipides polaires membranaires archéens
Les lipides polaires membranaires archéenes sont extraits et analysés par
chromatographie sur couche mince selon la méthode décrite par Oren et al. (1996).