(Thèse partie 1)
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Matériel et Méthodes<br />
Pour la microscopie électronique à balayage, les cellules sont fixées par une solution de<br />
formaldéhyde à 10 % (v/v) pour 1 heure puis récupérées par centrifugation à 1 000 × g<br />
durant 20 minutes. Le pellet est resupendu dans une solution en NaCl à 2,3 % (p/v). Une<br />
goutte est placée sur un filtre Nucléopore 13 mm en polycarbonate (dimension des pores<br />
0,22 µm) et séchée pendant une nuit à température ambiante. Le spécimen est ensuite<br />
examiné au microscope électronique à balayage (XL 30 LaB6, Philips).<br />
3. 2. Ultrastructure interne des souches<br />
Elle a été révélée à partir de l’observation de coupes minces des isolats en<br />
microscopie électronique en transmission obtenue après croissance des souches sur leur<br />
milieu respectif.<br />
Les cellules sont récupérées par centrifugation à partir de culture en phase exponentielle.<br />
Elles sont ensuite progressivement déshydratées par immersion successive dans des<br />
solutions aqueuses d’éthanol de titre croissant jusqu’à 100 %. La préparation est incluse<br />
dans une résine, puis découpée en fines sections à l’aide d’un ultra microtome. Les coupes<br />
ultrafines sont colorées par des solutions d’acétate d’uranyle et de citrate de plomb. Elles<br />
sont placées sur des grilles et observées au microscope électronique en transmission Zeiss<br />
EM 902 à 80 kV.<br />
3. 3. Caractérisation physiologique<br />
Les milieux de cultures utilisés lors de la caractérisation des souches sont ceux<br />
précédemment décrits et les tests utilisés lors de l’identification des souches sont ceux cités<br />
pour la description de nouveaux taxons par Oren et al. (1997).<br />
L’influence sur la croissance de la température, du pH et de la concentration en sel est<br />
déterminée en variant un des paramètres alors que les deux autres sont maintenus<br />
constants. Pour chacun des paramètres, la gamme pour laquelle une croissance est observée<br />
a d’abord été déterminée. Cette étude est faite par ensemencement d’un milieu solide par<br />
0,1 ml de culture en phase de croissance exponentielle.<br />
Salinité