(Thèse partie 1)

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Matériel et Méthodes
Pour la microscopie électronique à balayage, les cellules sont fixées par une solution de
formaldéhyde à 10 % (v/v) pour 1 heure puis récupérées par centrifugation à 1 000 × g
durant 20 minutes. Le pellet est resupendu dans une solution en NaCl à 2,3 % (p/v). Une
goutte est placée sur un filtre Nucléopore 13 mm en polycarbonate (dimension des pores
0,22 µm) et séchée pendant une nuit à température ambiante. Le spécimen est ensuite
examiné au microscope électronique à balayage (XL 30 LaB6, Philips).
3. 2. Ultrastructure interne des souches
Elle a été révélée à partir de l’observation de coupes minces des isolats en
microscopie électronique en transmission obtenue après croissance des souches sur leur
milieu respectif.
Les cellules sont récupérées par centrifugation à partir de culture en phase exponentielle.
Elles sont ensuite progressivement déshydratées par immersion successive dans des
solutions aqueuses d’éthanol de titre croissant jusqu’à 100 %. La préparation est incluse
dans une résine, puis découpée en fines sections à l’aide d’un ultra microtome. Les coupes
ultrafines sont colorées par des solutions d’acétate d’uranyle et de citrate de plomb. Elles
sont placées sur des grilles et observées au microscope électronique en transmission Zeiss
EM 902 à 80 kV.
3. 3. Caractérisation physiologique
Les milieux de cultures utilisés lors de la caractérisation des souches sont ceux
précédemment décrits et les tests utilisés lors de l’identification des souches sont ceux cités
pour la description de nouveaux taxons par Oren et al. (1997).
L’influence sur la croissance de la température, du pH et de la concentration en sel est
déterminée en variant un des paramètres alors que les deux autres sont maintenus
constants. Pour chacun des paramètres, la gamme pour laquelle une croissance est observée
a d’abord été déterminée. Cette étude est faite par ensemencement d’un milieu solide par
0,1 ml de culture en phase de croissance exponentielle.
Salinité