(Thèse partie 1)
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2. Isolement, purification et conservation des souches<br />
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Matériel et Méthodes<br />
Des approches culturales et moléculaires ont été étudiées afin d’identifier la<br />
microflore isolée de la sebkha Ezzemoul. Les prélèvements ont été effectués au niveau des<br />
bassins de concentration et de cristallisation du sel.<br />
2. 1. Composition chimique des milieux de cultures utilisés<br />
Il est connu que les bactéries hyperhalophiles ont des exigences nutritionnelles<br />
variables et leur étude nécessite l’utilisation de plus d’un milieu de culture (Oren et al.,<br />
1997). Une dizaine de milieux spécifiques aux procaryotes neutrophiles et alcalophiles a<br />
été utilisés au départ avant d’opter pour sept milieux de culture. Ces milieux contiennent<br />
des sels minéraux, une source organique complexe (extrait de levure, casaminoacide…),<br />
des acides organiques et/ou des sucres (Tableau 5-Annexe 3). Ils sont conçus pour cultiver<br />
le plus grand nombre de procaryotes halophiles aérobies. Ces milieux ont servi, à la fois,<br />
pour l’isolement, et aussi de base pour les tests d’identification physiologique, biochimique<br />
et génétique.<br />
Les milieux de culture solides sont obtenus par addition de 20 g.l -1 d’Agar-Agar aux<br />
milieux liquides et stérilisés à 120°C pendant 20 minutes. Le pH est ajusté à 7,0 à l’aide<br />
d’une solution de NaOH 4 M.<br />
2. 2. Isolement<br />
L’isolement a été effectué par étalement de 0,1 ml sur boite de l’échantillon ou de ses<br />
dilutions. Ces dernières ont été effectuées en inoculant 9 ml d’une solution de NaCl à 20 %<br />
(p/v) avec 1 ml d’échantillon.<br />
2. 3. Conservation des souches<br />
De chaque milieu, huit à neuf colonies d’aspect différent ont été prélevées au et<br />
purifiées par stries sur les même de milieux solides. Les souches pures sont conservées sur