etude de la qualite microbiologique des viandes boucanées ... - L'ENS
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pério<strong>de</strong>, chaque type <strong>de</strong> colonie bien isolée et présentant <strong>de</strong>s caractéristiques particulières sont<br />
ensuite dénombrées.<br />
<br />
II-4 TEST DE CONFIRMATION DES MICROORGANISMES ISOLES<br />
- Examens microscopiques<br />
Examen à l’état frais<br />
Cet examen permet d’apprécier <strong>la</strong> morphologie <strong>de</strong>s bactéries, leur abondance et leur<br />
mobilité. Sur une <strong>la</strong>me porte-objet stérile, une goutte d’eau distillée est déposée ; un frottis y est<br />
ensuite réalisé avec quelques cellules bactériennes isolées sur un milieu donné. La préparation<br />
ainsi obtenue est couverte avec une <strong>la</strong>me couvre-objet stérile et observée au microscope<br />
optique à l’objectif 40 (Carbonelle et al., 1987).<br />
Coloration <strong>de</strong> Gram<br />
Cet examen permet <strong>de</strong> faire une c<strong>la</strong>ssification <strong>de</strong>s microorganismes en fonction <strong>de</strong> <strong>la</strong> teneur<br />
en lipi<strong>de</strong>s <strong>de</strong> <strong>la</strong> paroi. Elle comporte plusieurs étapes successives et se déroule comme suit :<br />
A l’ai<strong>de</strong> d’une anse <strong>de</strong> p<strong>la</strong>tine stérile, chaque type <strong>de</strong> colonie isolée sur milieu soli<strong>de</strong> est<br />
prélevé puis à partir <strong>de</strong> ses cellules, un frottis est réalisé sur une <strong>la</strong>me porte-objet stérile. La<br />
préparation ainsi obtenue est fixée par une chaleur modérée puis recouverte d’une solution <strong>de</strong><br />
violet <strong>de</strong> gentiane pendant une minute. Cette préparation est ensuite rincée à l’eau courante,<br />
recouverte d‘une solution <strong>de</strong> lugol pendant une minute, décolorée à l’éthanol 95° puis rincée à<br />
l’eau courante. Après recoloration par traitement à <strong>la</strong> fuschine pendant 30 secon<strong>de</strong>s, <strong>la</strong><br />
préparation est <strong>de</strong> nouveau rincée à l’eau courante puis <strong>la</strong> <strong>la</strong>me est égouttée et séchée entre 2<br />
feuilles <strong>de</strong> papier buvard ; <strong>la</strong> préparation ainsi réalisée est ensuite observée au microscope<br />
optique à l’objectif 100 après dépôt d’une goutte d’huile à immersion (Larry et Judy, 1995).<br />
Mise en évi<strong>de</strong>nce <strong>de</strong> <strong>la</strong> cata<strong>la</strong>se<br />
La cata<strong>la</strong>se est une enzyme qui décompose l’eau oxygénée en eau et en oxygène<br />
gazeux. La métho<strong>de</strong> consiste à prélever une colonie du germe à étudier sur l’extrémité d’une<br />
pipette Pasteur fermée et à l’immerger dans <strong>de</strong> l’eau oxygenée à 10 volumes (3 pour cent)<br />
déposée sur une <strong>la</strong>me porte-objet. Le dégagement <strong>de</strong> bulles gazeuses caractéristique du<br />
dégagement d’O2 traduit <strong>la</strong> présence <strong>de</strong> cette enzyme (Carbonnelle, 1987).