etude de la qualite microbiologique des viandes boucanées ... - L'ENS

période, chaque type de colonie bien isolée et présentant des caractéristiques particulières sont
ensuite dénombrées.
II-4 TEST DE CONFIRMATION DES MICROORGANISMES ISOLES
- Examens microscopiques
Examen à l’état frais
Cet examen permet d’apprécier la morphologie des bactéries, leur abondance et leur
mobilité. Sur une lame porte-objet stérile, une goutte d’eau distillée est déposée ; un frottis y est
ensuite réalisé avec quelques cellules bactériennes isolées sur un milieu donné. La préparation
ainsi obtenue est couverte avec une lame couvre-objet stérile et observée au microscope
optique à l’objectif 40 (Carbonelle et al., 1987).
Coloration de Gram
Cet examen permet de faire une classification des microorganismes en fonction de la teneur
en lipides de la paroi. Elle comporte plusieurs étapes successives et se déroule comme suit :
A l’aide d’une anse de platine stérile, chaque type de colonie isolée sur milieu solide est
prélevé puis à partir de ses cellules, un frottis est réalisé sur une lame porte-objet stérile. La
préparation ainsi obtenue est fixée par une chaleur modérée puis recouverte d’une solution de
violet de gentiane pendant une minute. Cette préparation est ensuite rincée à l’eau courante,
recouverte d‘une solution de lugol pendant une minute, décolorée à l’éthanol 95° puis rincée à
l’eau courante. Après recoloration par traitement à la fuschine pendant 30 secondes, la
préparation est de nouveau rincée à l’eau courante puis la lame est égouttée et séchée entre 2
feuilles de papier buvard ; la préparation ainsi réalisée est ensuite observée au microscope
optique à l’objectif 100 après dépôt d’une goutte d’huile à immersion (Larry et Judy, 1995).
Mise en évidence de la catalase
La catalase est une enzyme qui décompose l’eau oxygénée en eau et en oxygène
gazeux. La méthode consiste à prélever une colonie du germe à étudier sur l’extrémité d’une
pipette Pasteur fermée et à l’immerger dans de l’eau oxygenée à 10 volumes (3 pour cent)
déposée sur une lame porte-objet. Le dégagement de bulles gazeuses caractéristique du
dégagement d’O2 traduit la présence de cette enzyme (Carbonnelle, 1987).