La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...

tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011
Dosage de la chlorophylle a
Nous avons prélevé l’eau de mer destinée au dosage de la chlorophylle a à 2 mètres de
profondeur dans les deux stations d’échantillonnage. Le volume d’eau de mer échantillonné a
été de 2 litres dans la petite et la Grande Rade de Toulon. L’eau de mer a été filtrée sur une
membrane en microfibres de verre de type GF/F Whatman (porosité : 0,8 µm, diamètre 47
mm) préalablement conditionnée par l’ajout de 2 ml de solution saturée de carbonate de
magnésium (MgCO3). L’échantillon à été filtré avec une pression maximum de 380 mm d’Hg.
Le filtre obtenu a été immédiatement immergé dans 15 ml d’acétone à 90 %, puis laissé au
moins 24h à -20°C avant sonication et dosage au fluorimètre.
La méthode de dosage de la chlorophylle par fluorométrie a été mise au point par Yentsch et
Menzel (1963) puis décrite par Holm-Hansen et al. (1965) et par Strickland et Parsons (1972).
Elle est destinée au milieu marin, et a l’avantage d’être très sensible et ne nécessite qu’un
faible volume d’échantillon. Nous l’avons préférée à la méthode spectrophotométrique,
laquelle manque de sensibilité.
La concentration de chlorophylle a est déterminée en mesurant la fluorescence émise à une
longueur d’onde de 664 nm, à la suite d’une excitation à une longueur d’onde de 430 nm.
L’appareil utilisé (SFM 25, Bio-tek instruments) n’étant pas suffisamment précis pour
mesurer les phéopigments, les résultats présentés correspondent aux concentrations en
chlorophylle a sans la correction par les phéopigments (notamment la phéophytine a, laquelle
absorbe à une longueur d’onde voisine de la chlorophylle a et interfère avec elle (Trees et al.,
1985 ; Arar, 1994).
La concentration finale de chlorophylle a exprimée en µg/l, se calcule avec la formule
suivante :
[Cchl] = (FR * p * Vac) / V
Avec : FR = Fluorescence brute
p = coefficient directeur de la courbe d’étalonnage
Vac= Volume d’acétone ajouté au filtre (en ml)
V = Volume d’eau de mer filtrée (en litres)
Biovolume et biomasse phytoplanctonique
La détermination du biovolume a été réalisée après dénombrement des cellules
phytoplanctoniques. Le biovolume a été calculé selon la méthode de Lohman (1908) qui
assimile les cellules planctoniques à des formes géométriques de type sphérique ou
cylindrique.
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