La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...

tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011
En vue de l’analyse microscopique, les bactéries ont été colorées au DAPI (4,6-DiAmidino-2-
PhénylIndole) et dénombrées à l’aide d’un microscope inverse à épifluorescence de type
Leica DMI 4000 (Porter et Feig, 1980 ; Robertson et Button, 1989 ; Velji et Albright, 1993).
La densité bactérienne D a été exprimée en nombre de bactéries par ml d’eau de mer selon la
formule suivante :
D = (N * n) / V
Avec : N = nombre de bactéries dénombrées dans un champ.
n = nombre total de champs = ∏ * (d/2) 2 , avec d diamètre de la membrane, exprimé
en nombre de champs.
V = volume du sous-échantillon d’eau de mer, en ml.
4.2 Étude de la communauté phytoplanctonique
Les volumes d’eau de mer permettant l’étude du phytoplancton ont été prélevés à 2 mètres de
profondeur dans les deux stations d’échantillonnage à l’aide de bouteilles Niskin. Après le
prélèvement, l’eau de mer brute a été immédiatement additionnée de Lugol fort afin de
préserver et de colorer les organismes phytoplanctoniques (Bourrelly, 1966).
Compte tenu des faibles densités phytoplanctoniques, nous avons concentré 5 litres d’eau de
la Petite Rade de Toulon et 7 litres d’eau de la Grande Rade (moins riche en phytoplancton)
par filtration inverse.
L’échantillon d’eau de mer lugolée a ainsi été concentré jusqu’à obtenir un volume final de
100 ml. Puis, ce volume a été mis à sédimenter pendant 48 heures dans une colonne à
sédimentation sur laquelle a été adaptée une lame de comptage (Utermöhl, 1958).
Après leur sédimentation, les cellules phytoplanctoniques ont été dénombrées suivant la
méthode d’Utermöhl (1958), modifiée par Legendre et Watt (1971-1972).
Le dénombrement des cellules algales a été effectué sur 40 champs au minimum avec un
microscope inversé à contraste de phase Leica DMI 4000.
L’identification puis le dénombrement des organismes phytoplanctoniques ont été réalisés par
Nadège Rossi, doctorante de l’équipe EBMA, de mars à décembre 2005 dans le cadre de son
DEA, la suite du cycle annuel (jusqu’en mars 2006) a été effectuée par mes soins.
La densité phytoplanctonique D a été exprimée en nombre de cellules par litre d’eau de mer
échantillonné, selon la formule suivante :
D = (N * n) / V
Avec : N = nombre de cellules algales dénombrées dans un champ.
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