La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...

tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011
La mesure des activités à différentes concentrations de substrat permet de tracer la courbe de
Michaelis Menten qui représente la quantité de produit formé en fonction de la concentration
en substrat, par unité de temps.
Cette courbe se caractérise par sa vitesse maximale (ou Vmax) et sa constante de Michaelis
(ou Km) (figure 4). La Vmax correspond à l’activité pour une concentration infinie. Le Km
est la concentration en substrat correspondant à une activité égale à Vmax/2. Lorsque le Km
est élevé l’enzyme est peu active aux faibles concentrations de substrat et son affinité est
qualifiée de faible. Lorsque le Km est bas, l’enzyme est active aux faibles concentrations en
substrat et son affinité pour le substrat est forte.
V = -Km × (V/S) + Vmax
-Km
Figure 5 : Représentation d’Eadie Hofstee d’une simple activité michaelienne
Pour calculer les constantes cinétiques (Km et Vmax) les activités sont représentées en
fonction du rapport entre ces activités et les concentrations de substrat (transformation
d’Eadie Hofstee, figure 5). L’intersection de la droite ainsi obtenue avec l’axe des ordonnées
correspond à la Vmax et l’inverse de la pente, au Km (figure 5).
Dans bien des cas, la courbe obtenue lors de nos expériences n’était pas une droite. Nous
avons montré que ce type de cinétique résulte de la somme de deux composantes
michaeliennes, l’une à forte et l’autre à faible affinité, dont nous justifierons l’intérêt dans la
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