La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...

tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011
3.4 Etude des activités en fonction du pH
Afin de différentier les principales phosphatases, une étude des effets du pH sur les activités
dissoutes et particulaire a été effectuée. Dans le cas des activités particulaires, des mesures
sont pratiquées sur le plancton intact ainsi que sur du plancton broyé par passage au
sonicateur.
Pour la préparation des échantillons, le protocole est le même qu’au chapitre 3.2.
Les substrats sont préparés dans de l’eau filtrée sur 0,45 µm ou non filtrée.
Les pH sont les suivants : 9,5, 9, 8,5, 7 et 5,5. Au-delà de 9,5 un précipité se forme qui
empêche les mesures au spectrophotomètre. Ces pH ont été stabilisés à l’aide de tampons
spécifiques. Nous avons retenu pour les pH 7 et 5,5 un tampon Tris-Maléate 0,2 M et pour les
pH 9,5, 9 et 8,5 un tampon glycine 0,1 M.
Les pH ont été ajustés avec de la soude commerciale à 33 %.
3.5 Rappels de cinétiques enzymatiques et principes des calculs
Les activités phosphatasiques ont été rapportées soit au volume d’eau de mer, soit au volume
d’eau à partir duquel le matériel particulaire a été filtré, soit à la biomasse planctonique dans
le cas des activités particulaires spécifiques.
Activité
Vmax
Vmax/2
Kma Kmb
Substrat
Figure 4 : Exemples de Cinétiques de Michaelis-Menten.
Courbe A : Activité à forte affinité,
Courbe B : Activité à faible affinité.
44
A
B