La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...
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tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011<br />
<strong>en</strong>zymatiques. <strong>La</strong> durée de <strong>son</strong>ication est de 30 secondes pour les filtres de 1 à 90µ et de<br />
1mn30 pour les filtres à 0,45µ. On réalise ainsi un homogénat qui sera utilisé comme source<br />
d’<strong>en</strong>zymes.<br />
Isolem<strong>en</strong>t d’organismes zooplanctoniques<br />
L’activité phosphatasique de différ<strong>en</strong>tes espèces et clas<strong>ses</strong> de zooplancton a été égalem<strong>en</strong>t<br />
étudiée. Pour ce faire le zooplancton de la Petite Rade à été collecté grâce à un filet de maille<br />
90 µm. Ce conc<strong>en</strong>trat de zooplancton a été <strong>en</strong>suite transféré au laboratoire et placé à -20°C<br />
p<strong>en</strong>dant 2 à 4 heures dans l’eau de mer naturelle. Ce traitem<strong>en</strong>t a tué tous les organismes sauf<br />
certaines larves de Cirripèdes qui nageai<strong>en</strong>t <strong>en</strong>core après décongélation à température<br />
ambiante. Les organismes ainsi immobilisés ont pu être ainsi isolés plus facilem<strong>en</strong>t, sous une<br />
loupe binoculaire et grâce un mandrin sur lequel un fil de tungstène <strong>en</strong> forme de lasso a été<br />
fixé.<br />
Des spécim<strong>en</strong>s de Nauplii, Copépodites et adultes de Copépodes (Calanoïdes et Cyclopoïdes)<br />
de Cladocères (Evadné, Podon), de Nauplii de Cirripèdes et de Zoés de Malacostracés ont été<br />
ainsi collectés séparém<strong>en</strong>t dans des tubes Epp<strong>en</strong>dorf cont<strong>en</strong>ant 250 µl d’eau distillée.<br />
Les échantillons ont <strong>en</strong>suite été <strong>son</strong>iqués <strong>en</strong> maint<strong>en</strong>ant la température à 2°C afin de réaliser<br />
un homogénat qui sera utilisé comme source d’<strong>en</strong>zyme.<br />
Des prélèvem<strong>en</strong>ts de zooplanctontes vivants ont égalem<strong>en</strong>t été réalisés sans congélation et<br />
avec le même appareillage. Pour mesurer l’activité exo<strong>en</strong>zymatique sécrétée par le<br />
zooplancton, des organismes vivants ont été placés p<strong>en</strong>dant 24h à 20°C dans de l’eau de mer<br />
filtrée sur 0,45 µm dans laquelle la mesure de l’activité phosphatasique a été effectuée avec et<br />
après incubation.<br />
3.3 Mesure des activités <strong>en</strong>zymatiques<br />
Avec le paranitrophényl-phosphate (pNPP)<br />
Principe du dosage<br />
L’hydrolyse <strong>en</strong>zymatique du paranitrophényl phosphate par la <strong>phosphatase</strong> <strong>alcaline</strong> libère du<br />
PO4 3- et un alcool (le paranitrophénol ou pNP) coloré <strong>en</strong> jaune, prés<strong>en</strong>tant une absorbance<br />
maximale à 410nm :<br />
pNPP + H2O p-NP + PO4 3-<br />
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