La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...
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tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011<br />
L’autre substrat fluoresc<strong>en</strong>t, le 3.o. méthylfluoresceine phosphate, est égalem<strong>en</strong>t fréquemm<strong>en</strong>t<br />
utilisé (Hill et al., 1968 ; Perry, 1972 ; Jans<strong>son</strong>, 1976, 1977 ; Wetzel, 1981 ; Francko, 1983 ;<br />
Newman et Reddy, 1992, 1993). Mais il <strong>en</strong>traîne un fort bruit de fond de fluoresc<strong>en</strong>ce qui<br />
oblige d’utiliser de trop faibles conc<strong>en</strong>trations.<br />
Le glycérophosphate et le phénol-phtaléine phosphate <strong>son</strong>t souv<strong>en</strong>t employés <strong>en</strong> biologie<br />
cellulaire pour caractériser la <strong>phosphatase</strong> acide, mais beaucoup plus rarem<strong>en</strong>t pour la mesure<br />
de l’activité de la <strong>phosphatase</strong> <strong>alcaline</strong>.<br />
Le para-nitrophényl phosphate ou p-NPP, est le substrat le plus classique, notamm<strong>en</strong>t dans de<br />
le domaine de l’hydrobiologie (Reichardt et al., 1967 ; Heath et Cooke, 1975 ; Stev<strong>en</strong>s et<br />
Parr, 1977 ; Halemejko et Chrost, 1984 ; Boavida et Heath, 1988, Jamet et al., 1994).<br />
Nous avons utilisé deux de ces substrats : le méthylumbelliféryl phosphate et le<br />
paranitrophényl-phosphate pour <strong>en</strong> comparer la s<strong>en</strong>sibilité.<br />
3.2 Préparation des échantillons<br />
Mesure de l’activité de l’eau de mer<br />
L’eau de mer r<strong>en</strong>ferme une activité phosphatasique dissoute et une activité particulaire.<br />
L’<strong>en</strong>semble de ces deux activités constitue l’activité totale. Cette activité totale est mesurée <strong>en</strong><br />
solubilisant le substrat dans 30 ml d’eau de mer prov<strong>en</strong>ant des deux sites.<br />
L’activité dissoute est mesurée sur l’eau de mer passée sur des filtres GELMAN de 0,45 µm<br />
<strong>en</strong> ester de cellulose. Par différ<strong>en</strong>ce avec l’activité totale, on obti<strong>en</strong>t l’activité particulaire. Ces<br />
mesures <strong>son</strong>t pratiquées sur les échantillons d’eau fraîchem<strong>en</strong>t prélevés.<br />
Ces expéri<strong>en</strong>ces ont été réalisées à l’aide du MUFP et du pNPP.<br />
Contribution des clas<strong>ses</strong> de taille du matériel particulaire intact :<br />
Afin de préciser l’activité des principales clas<strong>ses</strong> de taille responsables de l’activité<br />
particulaire, des filtrations inver<strong>ses</strong> d’échantillons d’eau de mer ont été réalisées. Le principe<br />
de cette expéri<strong>en</strong>ce appliquée au zooplancton est prés<strong>en</strong>té dans la figure 3.<br />
Six litres d’eau <strong>son</strong>t d’abord filtrés <strong>en</strong> utilisant une membrane SEFAR de 90 µm. On<br />
conc<strong>en</strong>tre ainsi au moins 20 fois le zooplancton.<br />
Deux litres d’eau de mer <strong>son</strong>t égalem<strong>en</strong>t conc<strong>en</strong>trés par filtration inverse <strong>en</strong>viron 10 fois<br />
grâce à une membrane de 6 µm. Le zooplancton et le phytoplancton <strong>son</strong>t ainsi conc<strong>en</strong>trés<br />
simultaném<strong>en</strong>t.<br />
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