La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...

tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011
L’autre substrat fluorescent, le 3.o. méthylfluoresceine phosphate, est également fréquemment
utilisé (Hill et al., 1968 ; Perry, 1972 ; Jansson, 1976, 1977 ; Wetzel, 1981 ; Francko, 1983 ;
Newman et Reddy, 1992, 1993). Mais il entraîne un fort bruit de fond de fluorescence qui
oblige d’utiliser de trop faibles concentrations.
Le glycérophosphate et le phénol-phtaléine phosphate sont souvent employés en biologie
cellulaire pour caractériser la phosphatase acide, mais beaucoup plus rarement pour la mesure
de l’activité de la phosphatase alcaline.
Le para-nitrophényl phosphate ou p-NPP, est le substrat le plus classique, notamment dans de
le domaine de l’hydrobiologie (Reichardt et al., 1967 ; Heath et Cooke, 1975 ; Stevens et
Parr, 1977 ; Halemejko et Chrost, 1984 ; Boavida et Heath, 1988, Jamet et al., 1994).
Nous avons utilisé deux de ces substrats : le méthylumbelliféryl phosphate et le
paranitrophényl-phosphate pour en comparer la sensibilité.
3.2 Préparation des échantillons
Mesure de l’activité de l’eau de mer
L’eau de mer renferme une activité phosphatasique dissoute et une activité particulaire.
L’ensemble de ces deux activités constitue l’activité totale. Cette activité totale est mesurée en
solubilisant le substrat dans 30 ml d’eau de mer provenant des deux sites.
L’activité dissoute est mesurée sur l’eau de mer passée sur des filtres GELMAN de 0,45 µm
en ester de cellulose. Par différence avec l’activité totale, on obtient l’activité particulaire. Ces
mesures sont pratiquées sur les échantillons d’eau fraîchement prélevés.
Ces expériences ont été réalisées à l’aide du MUFP et du pNPP.
Contribution des classes de taille du matériel particulaire intact :
Afin de préciser l’activité des principales classes de taille responsables de l’activité
particulaire, des filtrations inverses d’échantillons d’eau de mer ont été réalisées. Le principe
de cette expérience appliquée au zooplancton est présenté dans la figure 3.
Six litres d’eau sont d’abord filtrés en utilisant une membrane SEFAR de 90 µm. On
concentre ainsi au moins 20 fois le zooplancton.
Deux litres d’eau de mer sont également concentrés par filtration inverse environ 10 fois
grâce à une membrane de 6 µm. Le zooplancton et le phytoplancton sont ainsi concentrés
simultanément.
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