La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...

tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011
Echant Blc réact Blanc réact
+catalyseurs
10’+5’
1400W
38
10’+5’
900W
20’+5’
900W
Do 885 2 13 50 49 46 45
Tableau 2 : influence de durée d’expérience et de la puissance du micro-ondes
sur le dosage des orthophosphates (DO à 885 nm)
30’+5’
900W
Le tableau 2 montre qu’une puissance de 900 watts et une montée en puissance de 10 minutes
suivie d’un maintien à cette puissance pendant 5 minutes, sont suffisantes pour réaliser une
hydrolyse totale des échantillons. Ce sont ces conditions que nous retiendrons pour nos
expériences.
Le minéralisateur à micro-ondes mesure à chaque passage de la cuve devant le detecteur la
température et la pression dans la cuve. Lors de nos expériences, une température maximale
moyenne de 140°C ainsi qu’une pression maximale moyenne de 35 bars ont été enregistrées.
Le phosphore particulaire (PP)
Nous avons dosé le phosphore organique oxydable particulaire. Il représente la forme
particulaire du phosphore organique réfractaire qui ne peut être reminéralisé qu’à très long
terme dans un écosystème. Il est obtenu par différence entre le phosphore organique oxydable
total de l’eau de mer et le phosphore organique oxydable dissous.
Le phosphore organique oxydable total est mesuré au moyen de la même technique que celle
employée pour le dosage du phosphore organique oxydable dissous, mais en utilisant les
aliquotes d’eau brute non filtrée.
3. Mesures des activités phosphatasiques
La phosphatase est une enzyme qui agit sur les mono esters phosphoriques (un ester est une
combinaison acide - alcool) par hydrolyse (décomposition de la molécule en utilisant une ou
plusieurs molécules d'eau) en libérant des ions orthophosphates. Certaines phosphatases sont
spécifiques d'un ester phosphorique donné. C'est le cas de la glucose-6-phosphatase ou de la
fructose-1-6-phosphatase. Mais la plupart des phosphatases sont peu spécifiques, c'est-à-dire
qu'elles agissent sur un grand nombre d’esters phosphoriques. C’est le cas de la phosphatase
alcaline.
La réaction impliquant la phosphatase alcaline comporte quatre étapes (figure 2)
Etape 1 : liaison non covalente du substrat et de l’enzyme