La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...

tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011
vitesse d'hydrolyse
(Do 410 nm)
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
concentration d'enzyme (mg/l)
36
1h d'hydrolyse
1h 30
2h
2h 30
Figure 1 : test de la vitesse d’hydrolyse du pNPP en fonction des concentrations de phosphatase
La figure 1 montre qu’une concentration en enzyme d’au moins 0,56 mg/l est suffisante pour
hydrolyser en moins de deux heures tout le pNPP
Toutefois cette addition d’enzyme peut interagir avec le dosage des ions orthophosphates. En
effet les protéines inhibent la formation des composés phosphomolybdiques. Pour apprécier
l’importance de ces interactions, des dosages de phosphore ont été réalisés en présence de
concentrations de phosphatase comprises entre 0,035 et 9 mg/l mises en présence d’une
concentration en orthophosphate de 0,5 µM.
Phosphatase
mg/l 9 mg/l 2,25 mg/l 0,56 mg/l 0,14 mg/l 0,035 mg/l Témoin Témoin
Do 885 18 104 130 139 154 140 145
Tableau 1: influence de la concentration de phosphatase sur le dosage des orthophosphates
(DO mesurées à 885 nm)
Le tableau 1 montre que lorsque la concentration en phosphatase dépasse 0,56 mg/l une
interaction avec le dosage du phosphore se produit. Pour nos expériences, nous utiliserons une
concentration de phosphatase alcaline de 0,56 mg/l qui limite les interactions avec le dosage
du phosphore, et une durée d’incubation de 2h à 37 °C pour hydrolyser la totalité des
composés phosphorés organiques hydrolysables. Une gamme étalon de phosphore contenant
la même concentration de phosphatase est également effectuée à chaque dosage.
Les concentrations de PHPase sont ensuite calculées par différence entre les concentrations en
orthophosphate libérées après addition de phosphatase bovine et les concentrations initiales de
chaque échantillon.