La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...

tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011
l’eau de mer afin de se rapprocher des conditions naturelles, plutôt que de recourir à un milieu
spécifique ajusté au pH optimum de l’enzyme. Certains auteurs (Ammerman et Azam, 1991 ;
Van Wambeke et al. 2002) ont évoqué l’influence alors possible de substrats naturels
(phosphore organique dissous et particulaire) sur l’activité phosphatasique lorsque l’eau de
mer est utilisée pour dissoudre le pNPP ou le MUF-P. Ces substrats peuvent être des
compétiteurs, d’autant que leurs concentrations sont souvent du même ordre de grandeur que
les Km du MUF-P. Toutefois ce type d’interaction n’a d’influence que sur le Km, laissant les
Vmax inchangées.
L’utilisation d’aliquotes d’eau de mer de 10 à 50 ml est mal adaptée pour la mesure des
activités phosphatasiques ou des concentrations du phosphore des organismes planctoniques
dont la densité est faible. C’est le cas des fractions de taille >90 µm constituées surtout de
zooplancton. Pour pallier ce problème, les dosages du phosphore ont été réalisés en triplicatas.
Quant à la mesure de l’activité phosphatasique, l’utilisation d’une large gamme de
concentrations en substrats et l’analyse des cinétiques d’Eadie Hofstee permettent de limiter
l’incidence de ces problèmes d’échantillonnage.
Pour les mesures des activités particulaires des différentes classes de taille, les échantillons
ont été préalablement congelés à -80°C. Une perte d’activité enzymatique peut en résulter.
Toutefois, des études préalables sur le zooplancton ont montré que l’activité exprimée par la
Vmax n’était pas significativement plus basse après congélation (Lespilette et al., 2007). De
plus, les activités à forte affinité des activités congelées et intactes sont tout à fait comparables
(voir figure 17 chapitre II). L’effet de la congélation sur des échantillons destinés au dosage
du phosphore et de l’azote a été étudié par de Krom et al. (2005). Ces auteurs ont montré que
la congélation est acceptable pour des échantillons dont la concentration est supérieure à 20
nM pour le PID et à 400 nM pour le DIN. Ces niveaux sont atteints exceptionnellement pour
le phosphore dans la rade.
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