La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...
La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...
La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011<br />
phosphorés : la <strong>phosphatase</strong> <strong>alcaline</strong> et la 5’ nucléotidase qui hydrolys<strong>en</strong>t les<br />
phosphomonoesters et la PhosphoDiesterase qui hydrolyse les phosphodiesters.<br />
Les phosphomonoestéra<strong>ses</strong> les plus communém<strong>en</strong>t r<strong>en</strong>contrées <strong>en</strong> eau de mer <strong>son</strong>t la<br />
<strong>phosphatase</strong> acide et <strong>alcaline</strong> et la 5’Nucléotidase (Hoppe, 2003). Martinez et al., (1996) ont<br />
mis <strong>en</strong> évid<strong>en</strong>ce lors d’études préliminaires que le MUF-P pouvai<strong>en</strong>t être aussi hydrolysé par<br />
l’une que par l’autre <strong>en</strong>zyme. Il <strong>en</strong> est de même pour le pNPP qui prés<strong>en</strong>te par ailleurs, une<br />
spécificité vis à vis de la <strong>phosphatase</strong> bi<strong>en</strong> moindre que le MUF-P. Le pNPP est notamm<strong>en</strong>t<br />
hydrolysé par les ATPa<strong>ses</strong> et les nucléotida<strong>ses</strong> acides, qui <strong>son</strong>t surtout prés<strong>en</strong>tes dans la<br />
fraction zooplanctonique (Perona et Vallejo, 1985).<br />
En plus de ce manque de spécificité, la mesure des activités phosphatasiques à l’aide du pNPP<br />
souffre d’un manque de s<strong>en</strong>sibilité <strong>en</strong> particulier lors de mesure de l’activité dissoute (Hoppe,<br />
2003), la détection des activités dissoutes nécessitant des temps d’incubation plus longs avec<br />
le pNPP qu‘avec le MUF-P. Lorsque ces durées dépass<strong>en</strong>t 24 heures, nous avons constaté<br />
qu’un développem<strong>en</strong>t de bactéries pouvait se produire avec le pNPP lorsque <strong>ses</strong><br />
conc<strong>en</strong>trations dépass<strong>en</strong>t 5 mM. Une augm<strong>en</strong>tation de l’activité phosphatasique de l’eau peut<br />
<strong>en</strong> résulter. En revanche, le p-NPP convi<strong>en</strong>t pour mesurer l’activité du matériel particulaire<br />
préconc<strong>en</strong>tré, une ou deux heures d’incubation étant suffisantes. Par ailleurs, comme ces deux<br />
substrats <strong>son</strong>t artificiels, ils ne <strong>son</strong>t pas représ<strong>en</strong>tatifs des substrats naturels. De ce fait, leur<br />
intérêt réside surtout dans la mise <strong>en</strong> évid<strong>en</strong>ce des relations avec les variables<br />
<strong>en</strong>vironnem<strong>en</strong>tales (Suida 1984). <strong>La</strong> comparai<strong>son</strong> des activités phosphatasiques mesurées<br />
avec le MUFP et le pNPP a montré qu’elles prés<strong>en</strong>t<strong>en</strong>t souv<strong>en</strong>t une évolution assez semblable<br />
au cours du cycle annuel, avec d’assez bons coeffici<strong>en</strong>ts de corrélation. Toutefois le MUF-P<br />
doit être préféré, surtout lorsque les mesures <strong>son</strong>t pratiquées sur de courts intervalles de<br />
temps.<br />
Choix de la température<br />
Une température d’incubation constante de 20°C à été ret<strong>en</strong>ue pour les mesures des activités<br />
<strong>en</strong>zymatiques. Elle correspond à la température moy<strong>en</strong>ne de l’eau de mer, et de ce fait semble<br />
préférable à celle de 37 °C souv<strong>en</strong>t utilisée même <strong>en</strong> <strong>milieu</strong> aquatique.<br />
1.3 Choix du <strong>milieu</strong> et du pH<br />
L’utilisation d’un tampon pour stabiliser le pH des <strong>milieu</strong>x d’incubation est souv<strong>en</strong>t<br />
préconisée (Hoppe 2003). Mais l’eau de mer étant naturellem<strong>en</strong>t tamponnée, nous n’y avons<br />
pas ajouté de tampon supplém<strong>en</strong>taire, sauf au cours de l’étude spécifique des effets du pH.<br />
Nous avons choisi de réaliser les mesures du cycle annuel <strong>en</strong> dissolvant les substrats dans de<br />
227