La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...

tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011
phosphorés : la phosphatase alcaline et la 5’ nucléotidase qui hydrolysent les
phosphomonoesters et la PhosphoDiesterase qui hydrolyse les phosphodiesters.
Les phosphomonoestérases les plus communément rencontrées en eau de mer sont la
phosphatase acide et alcaline et la 5’Nucléotidase (Hoppe, 2003). Martinez et al., (1996) ont
mis en évidence lors d’études préliminaires que le MUF-P pouvaient être aussi hydrolysé par
l’une que par l’autre enzyme. Il en est de même pour le pNPP qui présente par ailleurs, une
spécificité vis à vis de la phosphatase bien moindre que le MUF-P. Le pNPP est notamment
hydrolysé par les ATPases et les nucléotidases acides, qui sont surtout présentes dans la
fraction zooplanctonique (Perona et Vallejo, 1985).
En plus de ce manque de spécificité, la mesure des activités phosphatasiques à l’aide du pNPP
souffre d’un manque de sensibilité en particulier lors de mesure de l’activité dissoute (Hoppe,
2003), la détection des activités dissoutes nécessitant des temps d’incubation plus longs avec
le pNPP qu‘avec le MUF-P. Lorsque ces durées dépassent 24 heures, nous avons constaté
qu’un développement de bactéries pouvait se produire avec le pNPP lorsque ses
concentrations dépassent 5 mM. Une augmentation de l’activité phosphatasique de l’eau peut
en résulter. En revanche, le p-NPP convient pour mesurer l’activité du matériel particulaire
préconcentré, une ou deux heures d’incubation étant suffisantes. Par ailleurs, comme ces deux
substrats sont artificiels, ils ne sont pas représentatifs des substrats naturels. De ce fait, leur
intérêt réside surtout dans la mise en évidence des relations avec les variables
environnementales (Suida 1984). La comparaison des activités phosphatasiques mesurées
avec le MUFP et le pNPP a montré qu’elles présentent souvent une évolution assez semblable
au cours du cycle annuel, avec d’assez bons coefficients de corrélation. Toutefois le MUF-P
doit être préféré, surtout lorsque les mesures sont pratiquées sur de courts intervalles de
temps.
Choix de la température
Une température d’incubation constante de 20°C à été retenue pour les mesures des activités
enzymatiques. Elle correspond à la température moyenne de l’eau de mer, et de ce fait semble
préférable à celle de 37 °C souvent utilisée même en milieu aquatique.
1.3 Choix du milieu et du pH
L’utilisation d’un tampon pour stabiliser le pH des milieux d’incubation est souvent
préconisée (Hoppe 2003). Mais l’eau de mer étant naturellement tamponnée, nous n’y avons
pas ajouté de tampon supplémentaire, sauf au cours de l’étude spécifique des effets du pH.
Nous avons choisi de réaliser les mesures du cycle annuel en dissolvant les substrats dans de
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