La phosphatase alcaline en milieu marin: ses caractéristiques, son ...

tel-00641975, version 1 - 17 Nov 2011
rencontrée dans la Rade de Toulon. Pour pallier ce problème il est possible de pré-concentrer
le phosphore en le précipitant en milieu alcalin. C’est la méthode MAGIC développée par
Karl et Tien (1992) et modifiée par Thomson-Bulldis et Karl (1998). Elle permet d’abaisser la
limite de détection à 5nM avec une précision de ± 1 nM.
1.2 Dosage du phosphore organique
Le phosphore organique des échantillons est dosé après minéralisation en phosphore
inorganique. Cette minéralisation est généralement effectuée à des pressions et des
températures élevées, en présence d’un réactif oxydant (McKelvie et al. 1995), comme le
recommande la norme AFNOR (1997). Ridal et Moore, (1990) ont montré sur des extraits
d’eau de mer, que l’association de cette technique avec un traitement par les UV permettait
d’obtenir une meilleure minéralisation.
La différence entre les concentrations en PTD et en SRP correspond au POD (phosphore
organique dissous). Cependant cette fraction contient un certain nombre de composés
inorganiques non réactifs (au molybdate) comme les polyphosphates (Strickland et Parsons,
1972). De ce fait, le terme « phosphore soluble non-réactif » (SNP) est souvent préconisé à la
place de POD (Benitez-Nelson, 2000).
La méthode de dosage du phosphore enzymatiquement hydrolysable (PHPase) que nous
avons utilisée a été l’objet de mises au point préalables. Son principe consiste à ajouter de la
phosphatase purifiée dans l’eau et à doser le phosphore inorganique libéré. Ces mises au point
étaient nécessaires car la phosphatase alcaline commerciale ajoutée dans l’eau de mer
interagit avec les réactifs du dosage. C’est pourquoi une gamme étalon réalisée dans de l’eau
de mer contenant la même concentration de phosphatase a été réalisée en parallèle. Une
approche analogue à la nôtre a été développée en milieu marin côtier par Suzumura et al.
(1998). Ces auteurs ont montré que si la durée de l’incubation était trop longue, des bactéries
pouvaient se développer et utiliser le SRP libéré par l’enzyme, sous estimant ainsi sa
concentration. Ce développement bactérien n’a pu se produire au cours de nos expériences, le
temps d’incubation étant suffisamment court (2h).
1.3 Mesures des activités phosphatasiques
Deux phosphomonoesters ont été utilisés comme substrat pour la mesure de l’activité
phosphatasique, le MUF-P et le pNPP. Comme nous l’avons évoqué en introduction, en
milieu marin trois enzymes sont responsables de l’hydrolyse des composés organiques
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