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éditorial
Cette quatrième édition de bioFood,
le bulletin d’information international
pour les partenaires agro-alimentaires
de bioMérieux, traite largement des
risques microbiologiques liés aux
aliments et à l’environnement.
L’article du Professeur Patrick Wall sur les agents
infectieux d’origine alimentaire nous rappelle le
lien significatif existant entre la santé des animaux
producteurs d’aliments, la sécurité alimentaire et la
santé des consommateurs.
Une partie importante de ce bulletin d’information
est consacrée à la légionellose, un
problème international de santé publique. Les
auteurs décrivent l’épidémiologie, la prévention,
la surveillance et les sources de contamination,
de même qu’une nouvelle méthode d’analyse
proposée par bioMérieux.
Comme dans les éditions précédentes, des
utilisateurs expliqueront comment les solutions
bioMérieux ont pu faire la différence dans leur
laboratoire. Vous apprécierez tout spécialement
l’entretien avec le Dr. Shanker Reddy de l’USDA
(United States Department of Agriculture), portant
sur leur programme MDP (Microbiology Data
Program) et la méthode qu’ils ont choisie pour
dénombrer Escherichia coli, cet organisme
susceptible de provoquer de graves risques pour
la santé et qui est présent dans certains aliments.
Enfin, nous sommes heureux de vous annoncer
la publication prochaine aux éditions bioMérieux
du livre « Food Safety Handbook », lequel regroupe
l’expérience de 22 experts internationaux dans
les domaines de la sécurité et de la qualité
alimentaires. bioMérieux est très impliqué dans
l’amélioration de la qualité pour l’industrie agroalimentaire
et la distribution de produits toujours
plus sûrs aux consommateurs. Par le biais de cette
contribution, nous espérons jouer un rôle dans
l’amélioration de la santé publique.
Nous espérons que ce numéro 4 de bioFood
atteint son objectif en vous présentant un pôle
d’exploration des différents sujets de qualité et de
sécurité alimentaires et bien plus encore dans
notre environnement toujours plus complexe.
Votre point de vue est d’une importance vitale
pour ce bulletin. Réfléchissez aux sujets que vous
aimeriez voir développés dans les publications
futures et partagez vos expériences avec nos
lecteurs. Dans cette attente, nous vous souhaitons
une bonne lecture.
Alexandre Mérieux
Corporate Vice-President
Microbiologie Industrielle
enjeux
bi F d
n°4
Août 2007
Bulletin d'information international pour les partenaires agroalimentaires de bioMérieux
Zoonoses d’origine alimentaire en Europe: la situation en 2005 *
AUTEUR: Dr. PATRICK WALL
PROFESSEUR DE SANTÉ PUBLIQUE À
L’UNIVERSITY COLLEGE DE DUBLIN.
PRÉSIDENT DE L’AUTORITÉ
EUROPÉENNE DE LA SÉCURITÉ
ALIMENTAIRE (EFSA)
De nombreux agents infectieux d’origine alimentaire
étant zoonotiques, la santé des animaux producteurs
d’aliments est par conséquent liée de manière
indissociable à la sécurité alimentaire et à la santé des
consommateurs. Une compréhension de l’épidémiologie
des pathogènes humains dont le réservoir est
animal est nécessaire pour effectuer des interventions
efficaces permettant de lutter contre ces organismes
et ainsi de réduire l’incidence de la maladie humaine.
Une surveillance efficace, à la fois des animaux et
de l’homme, est essentielle afin de déterminer des
priorités de santé publique, détecter les menaces
émergentes, développer des mesures de lutte
ciblées et évaluer les interventions. Si des mesures
correctives doivent être introduites à des endroits
appropriés de la chaîne alimentaire, il est nécessaire
de comprendre les voies de transmission, les véhicules
alimentaires porteurs des agents et les pratiques
qui contribuent à l’apparition d’épidémies humaines.
L’approvisionnement en nourriture est à présent
effectué au niveau international et la maladie d’origine
alimentaire est un problème universel qui requiert
une solution universelle. L’importance accordée à la
collaboration entre les différents pays et au regroupement
des données sur les agents identifiés dans les
aliments pour animaux, les animaux, l’alimentation
humaine et les hommes de façon standard ne
peut en aucun cas s’avérer excessive. La directive
européenne sur les zoonoses détermine l’ensemble
des données minimales qui doivent être collectées
par tous les états membres et qui sont dorénavant
centralisées et comparées pour former la base du
rapport de l’Union Européenne sur les zoonoses.
En 2005, vingt-quatre états de l’Union Européenne
ont ainsi transmis des informations sur l’occurrence
des zoonoses, des agents zoonotiques, de la résistance
antimicrobienne et des épidémies d’origine
alimentaire à la Commission Européenne et à
l’Autorité européenne de la sécurité alimentaire
(EFSA). De plus amples informations sur les cas de
zoonose chez l’homme ont par ailleurs été obtenues
auprès du Centre européen de prévention et de lutte
contre les maladies (ECDC). Ces données couvraient
16 maladies zoonotiques. Assistés de leurs centres
de collaboration sur les zoonoses, l’Autorité
européenne de sécurité des aliments (EFSA) et
l'ECDC, ont conjointement analysé les données et
publié les résultats dans le rapport de synthèse
communautaire annuel daté du 14 décembre
2006*. De plus, trois États non membres de l’UE ont
également fourni des informations sur les zoonoses,
intégrées à ce rapport.
L’analyse des données a permis d’établir clairement
que la campylobactériose a été la zoonose la plus
fréquemment signalée chez l’homme au sein de l’UE.
Le nombre de cas d’infections à Campylobacter a
augmenté de 7,8 % par rapport à l’année précédente,
soit un taux d’incidence de 51,6 cas pour 100000
personnes, avec un total de 197363 cas répertoriés.
La salmonellose occupe le deuxième rang en termes
de fréquence avec 176395 cas humains répertoriés,
et ce malgré une chute de 9,5 % par rapport à 2004,
ce qui équivaut à un taux d’incidence de 38,2
cas pour 100000 personnes.
Concernant les denrées alimentaires, la chair de
volaille fraîche constituait la principale source des
infections à Campylobacter et atteignait jusqu’à 66 %
d’échantillons positifs. Campylobacter a également
été assez fréquemment isolé chez la volaille vivante,
ainsi que chez des troupeaux de porcs et de bovins.
Avec 18 % d’échantillons positifs, Salmonella a été le
plus souvent détectée dans les viandes de volaille et
de porc fraîches. Pour les œufs de consommation, les
taux d’échantillons positifs variaient de 0 % à 6 %.
Une tendance globale à la baisse de la contamination
des œufs par Salmonella a été constatée au cours
des cinq dernières années.
Chez l’animal, Salmonella a été la plus fréquemment
signalée dans les volailles.
Salmonella, Campylobacter et certains virus étaient
les principales causes des épidémies d’origine
alimentaire signalées en 2005. Les œufs et les pâtisseries
représentaient les sources les plus fréquentes
d’épidémies dues à Salmonella, alors que la viande
de volaille constituait une source importante de
flambées dues à Salmonella ou à Campylobacter. Les
épidémies d’origine alimentaire causées par des virus
étaient le plus souvent liées à l’eau potable, aux fruits
et aux légumes. Des proportions relativement
importantes de Campylobacter et de Salmonella
isolés sur des animaux et des aliments ont présenté
un caractère de résistance aux agents antimicrobiens
couramment utilisés comme traitement chez
l’homme. C’est notamment le cas de la résistance
aux fluoroquinolones dans les isolats de
Campylobacter issus de volailles, où jusqu’à 94 %
des isolats ont été déclarés résistants à la ciprofloxacine.
Les infections d’origine alimentaire causées par
ces bactéries résistantes présentent un risque
particulier pour une partie des cas qui requièrent
un traitement par les antibiotiques du fait d’échecs
thérapeutiques potentiels.
En 2005, 9630 cas de yersiniose ont été signalés
chez l’homme. Les autres zoonoses bactériennes
telles que listériose, infections à Escherichia coli
vérotoxinogène (VTEC) et brucellose, ont représenté
environ 1000 à 3000 cas chez l’homme; par
ailleurs, un total de 119 cas de tuberculose à M. bovis
était enregistré.
Parmi les aliments prêts à consommer analysés, très
peu étaient porteurs de Listeria monocytogenes à
des taux supérieurs au seuil au-delà duquel le risque
pour la santé humaine est significatif. Les échantillons
dépassant ce seuil ont été le plus souvent signalés
dans des produits de la pêche prêts à consommer.
L’absence d’informations sur le sérotype et la
virulence des échantillons porteurs de VTEC et de
Yersinia dans les denrées alimentaires et chez l’animal
n’ont pu permettre de procéder à une évaluation
appropriée de la pertinence de ces données pour
l’analyse des cas humains.
Le rapport contient également des informations sur
la tuberculose bovine et la brucellose bovine ou
caprine/ovine et les zoonoses parasitaires, ainsi que
sur l’encéphalopathie spongiforme bovine, la grippe
aviaire, les parasites Cysticerci et Sarcocystis et la
fièvre Q chez l’animal.
Une normalisation plus importante des méthodes de
laboratoire et des protocoles, une augmentation des
techniques moléculaires pour des isolats de type
définitif et des recherches plus approfondies sur
les épidémies permettront d’obtenir des données
plus compréhensibles. La capacité de reconstituer
le parcours des pathogènes à travers la chaîne
alimentaire jusqu’à l’endroit où ils peuvent être
éliminés de façon optimale dépend de la qualité des
données de surveillance. Des variations entre les états
membres existent quant à la fréquence de la
maladie, ce qui relève en partie des différences dans
les systèmes de surveillance et les stratégies de lutte.
Étant donné que la nourriture circule librement sur le
marché unique, la sécurité des denrées alimentaires
fournies est au niveau de la source la moins sûre; par
conséquent, les états membres dont le niveau de
sécurité est le plus faible ont besoin de prendre des
leçons des états les mieux classés. La maladie
d’origine alimentaire pourra uniquement être réduite
si nous parvenons à mettre en place des méthodes
uniformes de surveillance et de réduction incrémentielle
des risques, efficaces tout au long de la chaîne
alimentaire et ce, dans tous les états membres et
également au-delà.
(*)Traduit de l’anglais sous la responsabilité de bioMérieux, cet article est en partie issu de « The Community Summary Report on Trends and Sources of Zoonoses,
Zoonotic Agents, Antimicrobial Resistance and Foodborne Outbreaks in the European Union in 2005 », The EFSA Journal (2006), 94.

produits & services*
TEMPO ® , des utilisateurs écrivent à bioFood
PERSONNE INTERVIEWÉE: SHANKER REDDY, PHD
FONCTION: MICROBIOLOGISTE, DIRECTEUR TECHNIQUE
ORGANISATION: UNITED STATES DEPARTMENT OF AGRICULTURE (USDA), AMS
PAYS : ÉTATS-UNIS
bioFood: Pourriez-vous nous décrire le
programme MDP?
Dr Shanker Reddy : MDP signifie
« Microbiology Data Program », programme de
données de microbiologie, initié en 2001 dans
le cadre de l’initiative présidentielle de sécurité
alimentaire (Presidential Food Safety Initiative)
de 1997. MDP est une partie des programmes
de surveillance des sciences, services et technologies
(MPO) du Service Marketing de l’agriculture
(Agricultural Marketing Service –
AMS) de l’USDA (UNITED STATES DEPART-
MENT OF AGRICULTURE). Depuis 1991, MPO
réalise également le programme de données
des pesticides (Pesticide Data Program - PDP).
Le schéma d’échantillonnage de MDP est basé
sur le modèle d’échantillonnage de PDP. Notre
objectif consiste à recueillir les données de base
et à déterminer quels pathogènes sont présents
dans les produits. Nous avons commencé par
rechercher les pathogènes bactériens dans les
produits nationaux et importés. Au début, en
2001, E. coli était testé en tant qu’organisme test
principal.
À partir de 2003, les choses ont changé. Nous
avons intégré des méthodes rapides, de nouvelles
techniques de pointe et l’automatisation dans
la sélection et l’identification des pathogènes.
En 2004, le programme a commencé à
utiliser une analyse unique à base d’enzymes
pour E. coli générique. De plus, les échantillons
positifs E. coli ont fait l’objet de tests de dépistage
complémentaires pour détecter E. coli pathogène,
en utilisant une méthode PCR multiplexe.
Nous avons également introduit la PCR pour
Salmonella et E. coli O157: H7.
Notre formation et nos méthodologies ont
permis à nos laboratoires de devenir des
intervenants de première ligne.
PERSONNE INTERVIEWÉE:
LUZ AMPARO MONTOYA
FONCTION: MICROBIOLOGISTE
SOCIÉTÉ: INDUSTRIA DE
ALIMENTOS ZENÚ
PAYS : COLOMBIE
ZENÚ est le fabricant
numéro un
des produits carnés
en Colombie et fait
partie du groupe
« Nacional de
Chocolates », l’une
des entreprises les
plus importantes
du marché alimentaire
colombien.
Notre entreprise a la réputation de fournir
des produits alimentaires caractérisés par
une forte valeur nutritionnelle, qui sont à la
fois synonymes de plaisir et de sécurité pour
nos consommateurs. Notre prépondérance
sur le marché s’appuie sur des normes de
qualité que nous respectons scrupuleusement
et sur l’innovation des produits. De
plus, dans le cadre de notre système de
qualité, nous sommes résolus à rechercher
des améliorations sur la façon d’exécuter
nos procédés.
Notre usine de production est certifiée ISO
9001 : 2000 depuis 2003. Ainsi, nos clients
apprécient en toute sérénité que, depuis la
sélection des matières brutes jusqu’aux
produits finis, toutes les étapes de notre
processus de production et de gestion de
l’hygiène dans l’usine sont contrôlées selon
bioFood: Pourquoi avez-vous envisagé
l’utilisation d’une nouvelle méthode pour vos
tests de contrôle de qualité?
S.R.: La méthode par production de gaz que nous
utilisions était destinée à la mise en évidence d’une
contamination fécale par E.coli thermotolérant.
Avec cette méthode, notre possibilité de détecter
d’autres échantillons positifs d’E.coli était par conséquent
restreinte. Il s’avérait inefficace d’utiliser une
méthode qui risquait de tuer les souches pathogènes
de E.coli. Nous avons voulu passer à une
méthode qui nous permet de détecter l’E.coli
pathogène, ce qui est important pour la santé
humaine, comme les souches produisant la toxine
dysentérique et l’entérotoxine.
bioFood: Comment avez-vous découvert
TEMPO‚ de bioMérieux?
S.R.: C’est au cours de congrès scientifiques
que nous en avons entendu parler la première
fois. Nos laboratoires utilisaient déjà des produits
bioMérieux, tels que VIDAS ® ‚ et VITEK ® ‚ et
avaient des contacts avec bioMérieux. Au sein
de nos laboratoires, l’intérêt grandissait pour un
système qui supprime l’influence humaine dans
l’interprétation des résultats de tests issus de
méthodes traditionnelles et qui automatise le
test dans son intégralité. La mise en œuvre de
la méthode NPP (Nombre le Plus Probable) est
la méthode de laboratoire la plus fastidieuse et
chronophage, pour l’analyse bactériologique. La
technologie TEMPO est également une
méthode enzymatique unique et l’automatisation
est utile pour la sélection de milliers d’échantillons
dans notre programme de contrôle.
BioFood: Avez-vous comparé TEMPO avec
d’autres méthodes?
S.R.: Nous avons comparé TEMPO E.coli
avec notre méthode actuelle, la méthode
« Coli Complete » qui est également la
des normes de qualité strictes. Pour renforcer
notre méthode d’assurance qualité, nous
avons également développé sur notre site
des processus reconnus au niveau
international, tels que la méthode d’analyse
des risques et maîtrise des points critiques
(HACCP). La philosophie de ZENÚ consiste
à investir de façon continue dans nos
établissements et l’équipement, afin de
garantir que nos clients recevront toujours les
meilleurs produits de haute qualité. Pour
cette raison, nous avons décidé d’introduire
l’automatisation dans notre laboratoire. En
2003, nous avons introduit le système
VIDAS ® conçu pour la détection rapide des
pathogènes et, en janvier 2007, nous avons
choisi d’utiliser TEMPO ® pour l’analyse des
indicateurs de qualité (Dénombrement de la
flore totale, des coliformes et d’E. coli).
En combinant TEMPO et VIDAS, nous avons
actuellement la solution automatisée
parfaitement adaptée à notre laboratoire de
microbiologie. Résultat: cette simplification
des méthodes que nous utilisons pour notre
travail quotidien a entraîné une amélioration
de la standardisation, de la précision, de la
fiabilité et de la traçabilité de nos tests. Avec
la combinaison de TEMPO et VIDAS,
l’avantage le plus important pour nous est le
gain de temps qui nous permet de concentrer
notre attention sur la gestion du système
de qualité et de l’améliorer. Ainsi, nous avons
pu également améliorer le support que
nous pouvons apporter, en tant que
microbiologistes, à l’usine de production et
aux collègues de notre nouveau centre de
recherche et de développement.
(*) Interviews traduites sous la responsabilité de bioMérieux.
méthode officielle de l’AOAC. Nous l’avons
également comparé à la méthode par production
de gaz. Nous avons discuté des résultats
de test avec Stan Bailey (USDA-ARS) qui
nous a donné son avis sur TEMPO pour les
échantillons de viande et de volaille. Dans
notre comparaison des méthodes à gaz, de
« Coli Complete » et de TEMPO, les données
sont comparables.
bioFood: Qu’attendiez-vous d’une méthode
d’indicateurs de qualité?
S.R.: Nous souhaitions standardiser une bonne
méthode. La méthode « Coli Complete » utilisée
dans MDP est une bonne méthode et TEMPO
se base sur le même procédé biochimique.
Nous voulions standardiser la méthode, la simplifier
et éliminer toute influence lors de la lecture
de la fluorescence des tubes NPP. Nous avons
réduit certains coûts de main-d’œuvre. Ainsi,
nous avons pu traiter tous les échantillons pour
E. coli pathogène par PCR multiplexe.
BioFood: Après avoir utilisé TEMPO au cours
des 3 à 6 derniers mois dans vos neuf laboratoires
MDP, que pouvez-vous en conclure?
S.R.: Les laboratoires sont très satisfaits
d’avoir adopté TEMPO. Nous obtenons des
valeurs quantitatives. Un gain de temps est
observé pour la préparation des milieux et
des tubes, la préparation des tubes NPP et le
traitement des échantillons. Les résultats
sont obtenus plus rapidement. La plupart
des échantillons ont des concentrations
faibles de E. coli. Nos laboratoires travaillent
également avec bioMérieux dans le but
d’optimiser le système TEMPO pour tester
les produits frais.
Actualités
7 ème conférence annuelle de
microbiologie alimentaire
de bioMérieux
Cette conférence s’est tenue le 5 juin 2007 à
l’auditorium de la Maison de la RATP à Paris.
Les sujets traités au cours de la conférence de
cette année sont toujours aussi importants que
lors de la première conférence, il y a sept ans.
Sept orateurs ont effectué des présentations
détaillées portant sur une grande variété de
sujets d’actualité, de l’incertitude dans les plans
d’échantillonnage à l’utilisation de nouveaux
outils comme TEMPO pour l’analyse de routine
des produits alimentaires.
Plus de 150 personnes ont participé à la conférence,
dont des représentants de laboratoires
de l’industrie agro-alimentaire, des laboratoires
prestataires, des centres de recherche publics
et privés et des établissements d’enseignement.
Pour la première fois dans l’histoire des
conférences, des participants francophones
suisses et belges étaient également présents.
Des collaborateurs de l’Agence Française de
Sécurité Sanitaire des Aliments et de l’École
Nationale Vétérinaire étaient présents pour partager
leurs commentaires et leur expérience.
Le retour d’informations des personnes présentes
à la conférence a été très positif et nous préparons
déjà la 8 ème conférence annuelle de 2008 en
faisant le maximum pour qu’elle devienne un
événement permanent du calendrier des
microbiologistes alimentaires français.
Actualités
3 ème Sommet Annuel
Canadien sur la Sécurité
Alimentaire
Le thème du 3 ème Sommet Annuel Canadien sur
la Sécurité Alimentaire, qui s’est tenu à Toronto,
dans l’Ontario, les 24 et 25 avril 2007, était « La
protection du consommateur et de votre société ».
Environ 140 personnes et 7 fournisseurs ont participé
à ce sommet.
Au cours de ces deux journées, différents sujets
allant des approches réglementaires de l’étiquetage
à la traçabilité en passant par la contamination
des emballages alimentaires et la lutte antiparasitaire
ont été présentés par des experts de
l’industrie agro-alimentaire.
Le deuxième jour de la conférence, bioMérieux
Canada Inc. a présenté TEMPO à un auditoire
d’environ 80 personnes. Ronald Johnson (directeur
produits de bioMérieux Inc. et coordinateur
scientifique gouvernement-industrie pour les Etats
Unis et le Canada) a présenté le sujet « Science
innovante pour la numération des organismes
indicateurs de qualité ». Cette présentation a porté
sur la manière dont les contributions des clients
du monde entier ont influencé le développement
de cet outil innovant qu’est TEMPO.
À la suite de cette présentation, les participants
ont écouté Michael Brodsky (président de Brodsky
Consultants) qui a présenté TEMPO comme “un
système de qualité pour les indicateurs de qualité,
la validation et l’accréditation”. Monsieur
Brodsky s’est concentré sur la manière dont
TEMPO répond aux exigences de la norme
ISO/IEC 17025 : 2005 pour l’accréditation.
L’accréditation des laboratoires selon la norme
ISO/IEC 17025: 2005 par des organismes
comme le Standards Council of Canada (SCC),
la Canadian Association of Environmental
Analytical Laboratories (CAEAL) et l’American
Association for Laboratory Accreditation (A2LA)
offre une reconnaissance internationale de la qualité
et de la compétence analytique, devenues
de plus en plus importantes pour les échanges
commerciaux nationaux et internationaux.
À la fin de la présentation, Carol Smith
(Responsable des ventes de bioMérieux Canada
Inc.) s’est jointe aux orateurs pour répondre aux
questions. Les délégués intéressés sont ensuite
venus au stand bioMérieux pour des démonstrations
pratiques sur TEMPO, réalisées par les
représentants des ventes et techniques de
bioMérieux Canada.
De gauche à droite: Stéphanie Bonneau, conseiller
technique du service d’assistance, Carol Smith,
Responsable des ventes pour l’industrie, Shirley
Fredette, directeur technique du service d’assistance,
Steve Boloudakis, chargé de compte pour l’industrie.
Un ouvrage bioMérieux
sur la sécurité alimentaire
(Food Safety Handbook)
pour aider à la fourniture
de produits plus sûrs aux
consommateurs.
Le livre “Food Safety Handbook, microbiological
challenges” a été élaboré grâce aux
contributions de 22 experts de renommée internationale
dont la spécialisation couvre
différents domaines de la sécurité
alimentaire.Ce manuel comporte des
chapitres consacrés à différents sujets microbiologiques,
comme les pathogènes actuels
transmis par les aliments,
le principe des pathogènes
émergeants, les approches
personnalisées, les plans de
contrôle qualité et le développement
de nouveaux
outils de diagnostic. Le
manuel de sécurité alimentaire
offre une compilation
d’informations intéressantes
dans un format convivial. Il
sera disponible d’ici fin 2007.
Si l’achat de ce manuel vous
intéresse, vous pourrez vous rendre sur :
www.biomerieux.com/editions.

Regard extérieur
Legionella et maladie du légionnaire :
surveillance épidémiologique et prévention*
AUTEUR: CHRISTOPHE GINEVRA
FONCTION: POST DOCTORANT
ORGANISME: CENTRE NATIONAL
DE RÉFÉRENCE DES LÉGIONELLES
PAYS : FRANCE
Legionella, l’agent responsable de la
maladie du légionnaire, est un pathogène
facultatif intracellulaire à Gram négatif présent
dans les environnements aquatiques. La
maladie du légionnaire ou légionellose est
une pneumonie grave nosocomiale ou
d’origine extra-hospitalière qui survient
sporadiquement ou par flambées. L’infection
est acquise par l’inhalation d’aérosols
contaminés par Legionella et provenant de
sources d’eau comme les tours de refroidissement,
les établissements thermaux, les
pommes de douches, les fontaines, etc. On
compte actuellement 50 espèces différentes
et 70 sérogroupes pour les Legionellaceae.
Exception faite de l’Australie et de la Nouvelle
Zélande, où l’espèce Legionella longbeachae
représente environ 30 % des cas, L. pneumophila
est impliquée dans 90 % des cas
de légionellose, le sérogroupe I (Lp1) constituant
environ 85 % du nombre total de cas.
En 2005, plus de 1500 cas ont été signalés
en France et environ 5700 en Europe; aux
États-Unis, le CDC estime que 8000 à 18000
patients sont hospitalisés chaque année pour
cause de maladie du légionnaire. Toutefois,
le niveau de surveillance n’est pas identique
dans tous les pays et l’implication de
Legionella dans la pneumonie pourrait donc
être sous-estimée dans certains pays.
La maladie du légionnaire touche particulièrement
les hommes présentant des facteurs
de risque comme l’immunosuppression, le
tabagisme, l’alcoolisme ou le diabète. La
mortalité associée est de l’ordre de 10 à 15 %
pour la légionellose d’origine extra-
L’analyse officielle de
Legionella nécessite
l’utilisation d’une
méthode classique
complexe (par exemple
ISO 11731, NF T 90-431)
faisant appel à des milieux
de culture très complexes mais
standardisés. Depuis de nombreuses
années, grâce au savoir-faire de bioMérieux
dans le domaine de la conception et de la
production de milieux de culture et grâce à
la collaboration avec les experts internationaux
de Legionella, plusieurs milieux de
culture prêts à l’emploi destinés aux tests
de Legionella sont commercialisés.
Combinaison fertilité-sélectivité
Le milieu de détection/numération (GVPC)
constitue une solution essentielle pour obtenir
des résultats viables: bioMérieux a développé
et commercialisé un milieu GVPC extrêmement
fertile pour toutes les espèces de
Legionella que l’on peut rencontrer dans les
eaux environnementales, dont les espèces
hospitalière et est supérieure pour la
légionellose nosocomiale. Le taux de
mortalité de la maladie du légionnaire dépend
également de la rapidité d’administration du
traitement antibiotique adapté, elle-même
étroitement liée à la possibilité d’obtenir le
diagnostic clinique exact.
Le risque de légionellose est lié à la densité
de Legionella dans la source d’eau. On sait
que les densités supérieures à 10 4 -10 5 ufc/litre
constituent une menace accrue potentielle
pour la santé humaine. La prévention
repose essentiellement sur le contrôle et la
maintenance des systèmes de distribution
d’eau. Les programmes nationaux de surveillance
mis en œuvre dans plusieurs pays
(comme la France et l’Angleterre) comprennent
le suivi régulier des concentrations de
Legionella dans des échantillons d’environnement.
La culture classique et, récemment,
la PCR quantitative en temps réel sont les
méthodes généralement utilisées pour
détecter et quantifier l’espèce Legionella dans
des échantillons d’eau. Les normes
françaises pour la culture et les dosages par
PCR sont respectivement la norme NFT
90-431 et la norme XPT 90-471.
En France, la déclaration de tous les cas de
maladie du légionnaire est obligatoire par le
biais d’un système de surveillance coordonné
par l’Institut de Veille Sanitaire. Un réseau
d’organismes répartis sur l’ensemble du
territoire (Direction des Affaires Sanitaires et
Sociales, Directions Régionales de l’Industrie,
de la Recherche et de l’Environnement et
Centre National de Référence des Légionelles)
réalise les tests. Ce système de surveillance
permet d’identifier rapidement les flambées,
les sources environnementales de contamination
et les souches présentant une
implication clinique particulière.
Le Groupe de Travail Européen sur les
potentiellement pathogènes autres que
L. pneumophila. Ce milieu est également
capable d’inhiber la croissance de la flore de
fond, facilitant ainsi la lecture et l’interprétation
des résultats des boîtes. L’excellente
combinaison fertilité-sélectivité implique que
le milieu est adapté à l’analyse de la majeure
partie des eaux environnementales.
Avec des ventes supérieures à 2 millions de
boîtes au cours des deux dernières années,
le milieu GVPC de bioMérieux est un succès
international et constitue le milieu privilégié
par de très nombreux laboratoires européens
et asiatiques. Une difficulté importante dans
le développement de ce milieu consistait à
garantir des caractéristiques de performances
constantes pendant toute la durée de vie
du produit. Naturellement, les matières
premières doivent être sélectionnées de
manière rigoureuse et une augmentation du
volume de remplissage des boîtes de Petri
implique la possibilité d’obtenir un pourcentage
d’humidité supérieur pendant
l’incubation des boîtes, ce qui est propice au
développement de Legionella.
Infections à Legionella (EWGLI) a été créé
en 1986. Ses membres sont des scientifiques
qui travaillent à améliorer la connaissance
et l’information sur les aspects épidémiologiques
et microbiologiques (clinique et
environnement) de la maladie du légionnaire.
Cet objectif est atteint par la surveillance
internationale de la maladie et des évolutions
des méthodes de diagnostic, de gestion et
de traitement. Dans ce groupe, un réseau est
chargé de la surveillance épidémiologique de
la légionellose associée aux déplacements:
le Programme Européen de Surveillance de
la Légionellose associée aux Voyages (EWGLI-
NET). Dans ce réseau, les collaborateurs sont
des représentants nationaux ou régionaux
des instituts de santé publique et de microbiologie
de chaque pays. 35 pays participent
actuellement à EWGLINET (24 pays de l’UE
et 11 pays n’appartenant pas à l’UE). Le site
internet de l’EWGLI (www.ewgli.org) contient
plusieurs directives qui présentent une
approche normalisée des procédures de
prévention et de détection des infections à
Legionella associées aux déplacements et
visent à renforcer l’harmonisation de ces
procédures entre les états-membres.
Aux États-Unis, le CDC fournit plusieurs
directives relatives à la surveillance de la
légionellose associée aux déplacements
(www.cdc.org). Compte tenu de la nature
inter-états des voyages aux États-Unis, une
surveillance à l’échelle nationale est nécessaire
pour détecter les flambées de
légionellose associée aux déplacements. Le
CDC s’appuie sur les services sanitaires des
états et locaux pour réaliser cette surveillance.
La surveillance par le biais du National
Notifiable Diseases Surveillance System
(système national de surveillance des maladies
à signaler, NNDSS) reste importante pour
suivre les tendances nationales et il est par
conséquent conseillé de signaler ces cas par
Détection et dénombrement de Legionella dans les
eaux environnementales: une analyse fastidieuse
bioMérieux propose également des milieux
de confirmation pour les espèces
Legionella (BCYE avec et sans L-cystéine) et
de nouveaux produits destinés exclusivement
à l’analyse de Legionella seront
commercialisé à court terme. Pendant ce
temps, bioMérieux continue à investir dans
le développement de nouveaux tests destinés
à l’analyse de Legionella et travaille sur
la prévention et le traitement des maladies
infectieuses et sur les problèmes connexes
de santé publique.
Kit de test d’identification
Le kit Legionella SLIDEX est un nouveau kit
hautes performances particulièrement adapté
aux exigences de la méthode et a été
développé à l’aide d’anticorps
ultramodernes produits
par bioMérieux.
le biais du
NNDSS. L’Infectious
Diseases Association of
America (IDSA) a elle aussi
élaboré des directives portant sur le
diagnostic et le traitement de la légionellose
d’origine extra-hospitalière et nosocomiale.
Le CDC fournit par ailleurs sur son site internet
plusieurs liens vers d’autres directives
comme celles visant à réduire le risque de
colonisation des bâtiments par Legionella,
disponibles auprès de l’American Society of
Heating, Refrigerating and Air-Conditioning
Engineers (ASHRAE*). En résumé, la prévention
primaire des flambées de légionellose
doit reposer sur le contrôle et la maintenance
corrects des réseaux de distribution d’eau et
des tours de refroidissement. La prévention
secondaire doit faire appel à une réaction
rapide à la suite de la détection d’un cas de
légionellose, ce qui comprend des enquêtes
environnementales destinées à identifier la
source de Legionella et la réalisation
d’opérations de décontamination adaptées
de manière à protéger le public.
(*) Traduit de l’Anglais sous la responsabilité de bioMérieux.
Réunion des experts
en Legionella
La 22 e réunion du Groupe de Travail
Européen sur les Infections à Legionella
(EWGLI) s’est tenue à Stockholm du 2 au
5 juin 2007. Plus de 160 personnes provenant
de 26 pays, dont certains visiteurs extraeuropéens,
ont participé à ce qui est
maintenant reconnu comme la plus
importante réunion annuelle de spécialistes
de Legionella et de la légionellose.
Les sujets suivants ont été traités au cours
de la conférence : épidémiologie, infections
nosocomiales, pathogenèse et diagnostic/aspects
cliniques, évaluation des risques, aspects environnementaux,
méthodes de typage moléculaire,
séroépidémiologie et sérodiagnostic.
Les données issues des différentes études
scientifiques réalisées ces dernières années,
associées à l’expérience acquise avec les trop
fréquentes épidémies et aux données collectées
par les réseaux de surveillance, montrent que, bien
que le risque que constitue Legionella soit loin d’être
éradiqué, il est progressivement maîtrisé. Toutefois,
malgré l’amélioration de la surveillance, la
détection plus précoce et la lutte efficace contre les
infections à Legionella ces dernières années,
quelques épidémies importantes surviennent
encore et de nombreux cas sporadiques et des
infections nosocomiales occasionnelles continuent
à être observés.
6000 cas confirmés ont été signalés en Europe en
2006, avec des incidents dans chaque pays. Il faut
maintenant mettre en pratique les enseignements
tirés de ces incidents afin de permettre une
meilleure gestion des risques à l’avenir. Les experts
d’Amérique du Nord et d’Australie ont contribué à
la réunion en partageant leurs réflexions sur la
gestion des risques et en discutant des progrès qu’ils
ont accomplis dans leur recherche scientifique.

Evaluation du nouveau kit Legionella SLIDEX pour l’identification de
Legionella pneumophila et anisa isolées dans des eaux environnementales*
Reyrolle M
Introduction
La répartition environnementale des espèces Legionella a est maintenant bien décrite,
Legionella pneumophila a représente près de 75 % de l’ensemble des espèces de
Legionella a (30 % pour
L. pneumophila a de sérogroupe 1 et 45 % pour
L.
pneumophila a des sérogroupes 2 à 15). Parmi les
Legionella a autres que pneumophila,
L. anisa a est l’espèce la plus fréquente dans l’environnement et représente près de 14 % (1). Les personnes exposées à
Legionella a peuvent développer la
maladie du légionnaire (0,5 à 5 % des humains exposés), avec un taux de mortalité compris entre 10 et 15 %, ou la fièvre de Pontiac (95 à 100 % des humains exposés). L. pneumophila pneumophilaa pourrait être responsable de 90 à 99 % des cas de
légionellose. L. anisa anisaa est maintenant considérée comme un indicateur possible de la contamination de l’eau par
L. pneumophila. Elle peut être nosocomiale et pourrait, dans de rares cas, être la cause de la maladie du légionnaire (3). Le
nouveau nouveau kit Legionella a SLIDEX a été développé par bioMérieux et évalué par un grand laboratoire privé d’analyse des eaux et par le Centre National de Référence des Légionelles (CNRL) de Lyon, pour l’identification de
L. pneumophila
et L. anisa anisa a isolées dans des échantillons d’eaux environnementales, environnementales, entre juin et septembre 2006.
Objectif
L’objectif de l’étude consistait à évaluer les performances (sensibilité et spécificité) du nouveau kit Legionella Legionellaa SLIDEX sur des échantillons d’eaux environnementales. Le kit Legionella a SLIDEX a été comparé au test au latex Legionella a couram
-
ment utilisé (Oxoid à Basingstoke, au Royaume Uni) sur des cultures pures obtenues sur BCYE avec un milieu à la L-cystéine, de genre Legionella a confirmé, et fournies à partir de la sous-culture de colonies présumées caractéristiques de
Legionella a obtenues sur milieu GVPC. Toutes les souches qui n’ont pas été identifiées comme
Legionella pneumophila a par le laboratoire avec les deux kits du commerce et toutes les souches de
Legionella a autres que pneumophila ont été
envoyées au CNRL pour identification finale (40 souches).
1, Ratat C2, Leportier M2, Desforges I2, Freney J1, Jarraud S1 Etienne J1. 1- Centre National de Référence des Légionelles (CNRL), CBE, HFME, Lyon France 2- bioMérieux, Marcy l’étoile France
08/07/006FR99089D/Ce document n’engage pas notre responsabilité légale. bioMérieux se réserve le droit de modifier les spécifications sans notification préalable. BIOMERIEUX et le logo bleu, VITEK,
SLIDEX, TEMPO et VIDAS sont des marques déposées et protégées appartenant à bioMérieux SA ou à l’une de ses filiales. Imprimé en France./RCS 394 805 113, bioMérieux RCS Lyon 673 620 399
science & technologie
Matériel
Echantillons et souches
331 échantillons d’eau : 156 eaux de tours de refroidissement
175 eaux chaudes sanitaires provenant de circuits de distribution
385 souches obtenues à partir des échantillons d’eaux
155 L. pneumophila SG 1
197 L. pneumophila SG 2-15
18 L. anisa
15 Legionella autres que pneumophila et anisa
(SG = sérogroupe)
Réactifs
Kit Legionella SLIDEX :
bioMérieux, référence 73120
L. pneumophila SG 1 Latex
L. pneumophila SG 2-15 Latex
L. anisa Latex
Aspect caractéristique de Legionella
sur milieu BCYE avec L-cystéine
Méthode du tube au latex
0,2 ml de sérum physiologique dans un tube
Dilacérer 4 à 10 col. de BCYE L-cyst
15 µl de suspension + 1 goutte de latex à côté
Mélanger les deux gouttes avec un bâtonnet
Rotation pendant 1 minute et lecture
Lecture : en 1 minute pour les kits bioMérieux et Oxoid
Résultat positif : agglutination nette en moins d’une minute
Résultat négatif : absence d’agglutination (ou granulation très fine)
Résultat pas interprétable : agglutination dans plusieurs latex
Test au latex Legionella :
Oxoid, référence N31932
L. pneumophila SG 1 Latex
L. pneumophila SG 2-14 Latex
Legionella spp. Latex : L. longbeachae 1 et 2, L.
bozemanii 1 et 2, L. dumolfii, L. gormanii, L.
jordanis, L. micdadei, L. anisa
- Confirmation du genre Legionella
Pour chaque boîte GVPC, réinoculer au minimum 3 colonies représentatives de chaque type de colonies
caractéristiques (mélange possible de plusieurs Legionella) sur :
Genre Legionella confirmé
Genre Legionella non confirmé
Incuber 2 à 3 jours à 37°C
BCYE BCYE
sans L-cysteine gélose au sang avec L-cystéine
- - +
ou croissance faible ou croissance faible
+ + +
Caractères phénotypiques pour l’identification avec les 2 kits au latex du commerce :
Méthode directe de la carte au latex
15 µl de soluté tampon de phosphate
Dilacérer 1 à 2 col. de BCYE L-cyst
Verser 1 goutte de latex à côté
Mélanger les deux gouttes avec un bâtonnet
Rotation pendant 1 minute et lecture
2- Méthode du CNRL pour la confirmation des 40 souches concernées
Caractères phénotypiques :
immunofluorescence systématique pour
Lp 1, Lp 2-15 : anticorps polyclonaux de
lapin (réactif interne du CNRL) (if)
latex monovalent pour chaque
sérogroupe 2 à 15 (lxm) (2)
Méthodes
1. Méthode de laboratoire pour la détection, la numération et l’identification
Détection selon la méthode normalisée NF T 90-431, identique à la norme ISO 11731.
Identification : caractéristique de culture pour la confirmation du genre Legionella.
Aspect de verre dépoli des colonies au
microscope binoculaire (grossissement 30 fois)
Biologie moléculaire :
amplification des gènes codant l’ARN
16S (16S)
séquençage génique mip (mip) (4)
PCR RAPD (pcr rapd) (5)
Discussion
Fluorescence bleue sous
une lampe UV (L. anisa)
Latex Lp 1:
Sensibilité : 100 % avec les kits bioMérieux et Oxoid (155 L. pneumophila SG1)
Spécificité : 100 % avec les kits bioMérieux et Oxoid (230 autres Legionella)
Latex Lp 2-14/15:
Sensibilité : bioMérieux 97,9 % (4 faux négatifs/197 L. pneumophila SG2-15)
Oxoid 96,4 % (7 faux négatifs/197 L. pneumophila SG2-14)
7 faux négatifs qui ne sont pas SG15 (SG6 confirmé par le CNRL)
Spécificité : 100 % avec les kits bioMérieux et Oxoid (188 autres Legionella)
Latex anisa/spp : les 18 souches de L. anisa sont fluorescentes sous la lampe UV
Sensibilité : 100 % avec les kits bioMérieux et Oxoid (18 souches)
Spécificité : bioMérieux 99,5 % (2 L. parisiensis faux positifs/367 autres que L. anisa)
Oxoid 98,1 % (7 faux positifs qui sont L. parisiensis ne figurant pas
dans le latex spp)
Applications bioMérieux
bioFood est une publication internationale de
bioMérieux Industrie.
• Directeur de la publication: Alexandre Mérieux
• Rédacteur en chef: Pascal Cruveiller
Ont contribué à ce numéro: Lisa Bezzole,
Carol Smith, Grégoire Bonnefois,
Isabelle Desforges, Joseph Jammal,
Diana Carolina Sanchez, Carol Smith,
Michelle Storrs-Mabilat, Koren Wolman-Tardy,
Chris Wells.
Remerciements particuliers à: Patrick Wall
(university Dublin College), Shanker Reddy
Kit Legionella SLIDEX Test au latex Legionella Oxoid
Identification finale Lp 1 Lp 2-15 L. anisa Negative Lp 1 Lp 2-14 L. spp Negative
du CNRL confirmée
Souches SG1 de
L. pneumophila
N=155
155 0 0 0 155 0 0 0
Souches SG2-15 de
L. pneumophila
N=197
0 193 0 4 0 190 0 7
Souches de L. anisa 0 0 18 0 0 0 18 0
n=18
Souches de L. autres que
pneumophila et anisa
N=15 ***
0 0 2** 13 0 0 7+1* 7
* 7 L. parisiensis et 1 L. longbeachae ** 2 L. parisiensis
*** 7 L. parisiensis, 1 L. erythra, 3 L. rubrilucens, 2 L. sainthelensis, 1 L. quinlivanii, 1 L. longbeachae
Sensibilité et spécificité des 2 kits du commerce :
Kit Legionella SLIDEX Latex Legionella Oxoid
Lp 1 Lp 2-15 L. anisa Lp 1 Lp 2-14 L. spp
Sensibilité %
(RP/(RP+FN))x100 100% 97,9% 100% 100% 96,4% 100%
Spécificité %
(RN/(RN+FP))x100 100% 100% 99,5% 100% 100% 98,1%
RP = vrai positif ; RN = vrai négatif ; FP = faux positif ; FN = faux négatif
Résultats du CNRL pour les 40 souches :
3 divergences :
Slidex (Lp 2-15
positif)/Oxoid
(négatif)
(USDA), Christophe Ginevra, Monique
Reyrolle, Sophie Javraud, Jean Frenez, Jérome
Etienne (National reference centre for
Legionella), Luz Amparo Montoya (ZENU),
Michael Brodsky (Brodsky consultants).
Mise en page et conception:
4 négatifs : Slidex
(Lp 2-15 négatif)/
Oxoid (négatif)
Résultats
40 souches
3 faux négatifs Oxoid 4 faux négatifs Oxoid et Slidex
false negatives
Confirmé
* 2 faux positifs/7 avec le latex L. anisa (Slidex)
et 7 faux positifs/7 avec le latex L. spp (Oxoid)
18 Slidex (L. anisa
positif)/Oxoid
(L. spp négatif)
3 Lp 2-15 4 Lp 2-15 18 L. anisa
14 résultats divergents entre les kits du commerce et les méthodes de référence du CNRL :
15 Legionella autres
que pneumophila et
anisa
7 L. parisiensis*
1 L. erythra
3 L. rubrilucens
2 L. sainthelensis
1 L. quinlivanii
1 L. longbeachae
CNRL SLIDEX Legionella OXOID Legionella
Résultats Technique utilisée Résultats Résultats
sérogroupe 4 if, lxm Négatif Négatif
sérogroupe 4 if, lxm Négatif Négatif
sérogroupe 4-8 if, lxm,16S+,mip+ Négatif Négatif
L. pneumophila sérogroupe 4-8-12 if, lxm,16S+,mip+ Négatif Négatif
sérogroupe 6 if, lxm Lp 2-15 Négatif
sérogroupe 6 if, lxm Lp 2-15 Négatif
sérogroupe 6 if, lxm Lp 2-15 Négatif
L. parisiensis pcr rapd L. anisa Legionella spp
L. parisiensis pcr rapd L. anisa Legionella spp
L. parisiensis pcr rapd Négatif Legionella spp
L. parisiensis L. parisiensis pcr rapd Négatif Legionella spp
L. parisiensis pcr rapd Négatif Legionella spp
L. parisiensis pcr rapd Négatif Legionella spp
L. parisiensis pcr rapd Négatif Legionella spp
Comparaison entre les méthodes du kit Legionella SLIDEX et de la carte :
les résultats de l’identification avec les 2 méthodes sont équivalents sur les 330 souches testées
et la corrélation est de 100 %.
Conclusion
Cette étude démontre les excellentes performances du nouveau kit Legionella SLIDEX
de bioMérieux.
Le kit Legionella SLIDEX de bioMérieux permet l’identification spécifique de L. anisa
(intéressante dans le cas d’une recherche épidémiologique) et la détection du nouveau
L. pneumophila SG 15.
La sensibilité pour L. pneumophila SG6 (souvent représenté dans les eaux environnementales)
est meilleure avec le kit Legionella SLIDEX de bioMérieux qu’avec le kit Oxoid.
Autres avantages du kit de bioMérieux mentionnés au cours de cette étude : le délai de
lecture plus court, la meilleure visibilité de l’agglutination, la simplicité d’utilisation et la
présentation compacte et pratique du kit.
Leader mondial dans le contrôle microbiologique, bioMérieux propose une gamme unique de tests d’assurance qualité en microbiologie couvrant les milieux de culture prêts à l’emploi, les tests d’identification, les indicateurs
de qualité, les tests de détection de pathogènes ou la microbiologie moléculaire. Nous nous sommes engagés à aider nos partenaires des industries agro-alimentaires à fournir des produits sûrs en toute confiance.
ISSN: 1951-2856
bioMérieux SA
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Tél. 33 (0) 4 78 87 20 00
Fax.33 (0) 4 78 87 20 90
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* Présenté lors du congrès 2007 de l’EWGLI qui a eu lieu à Stockholm
N’hésitez pas à nous écrire pour
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publier: biofood@eu.biomerieux.com